基因工程的基本工具a

1、1基因工程的基本工具（基因工程的基本工具（A）［知［知識(shí)梳理］梳理］實(shí)現(xiàn)這一精確的操作過程至少需要三種工具即準(zhǔn)確切割DNA的“手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶、將DNA片段再連接起來的“縫合針”——DNA連接酶、將體外重組好的DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的“運(yùn)輸工具”——（運(yùn)）載體（一）（一）、限制性核酸內(nèi)切酶、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”“分子手術(shù)刀”1、又稱限制酶或（限制性內(nèi)切酶）2、主要是從原核生物中分離純化出來的（不是說只有原核生物中有

2、、是原核生物的防御機(jī)制)3、一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，（大多數(shù)限制酶識(shí)別序列6個(gè)核苷酸組成）并在特定的切點(diǎn)（兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵）上切割DNA分子（體現(xiàn)酶的專一性；注意與解旋酶的區(qū)別）4、切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式——錯(cuò)位切：產(chǎn)生黏性末端黏性末端。平切：產(chǎn)生平口末端平口末端。例：1）GAATTC(寫出)CTTAAG2)CCCGGGGGGCCC(二)DNA連接酶連接酶——“分子縫合針”“分子縫合針”1、兩種

3、來源不同的DNA用同種限制酶切割后，末端可以相互黏合，這種只能使互補(bǔ)的堿基連接起來，脫氧核糖和磷酸交替連接而構(gòu)成的DNA骨架上的缺口（磷酸二酯鍵），需要靠DNA連接酶來“縫合”。2、根據(jù)酶的來源不同，可以將這些分為兩類：一類一類：從大腸桿菌中分離得到的，稱為EcoliDNA連接酶連接酶；只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間起來另一類另一類；從T4噬菌體中分離出來的，稱T4DNA連接酶連接酶；既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，

4、又可以“縫合”平末端，但連接平末端之間的效率比較低。（三）基因進(jìn)入受體細(xì)胞的（運(yùn)）載體（三）基因進(jìn)入受體細(xì)胞的（運(yùn)）載體——“分子運(yùn)輸車”“分子運(yùn)輸車”1、通常利用質(zhì)粒，質(zhì)粒存在于許多細(xì)菌以及酶母菌等生物中。質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌（細(xì)胞）染色體外（即擬核DNA）之外，具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀3既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的___________，又可以“縫合”___________，但連接平末端之間的效率比較低。（三）基因進(jìn)入受體細(xì)胞的

5、（運(yùn)）載體（三）基因進(jìn)入受體細(xì)胞的（運(yùn)）載體——“分子運(yùn)輸車”“分子運(yùn)輸車”1、通常利用__________________，質(zhì)粒存在于許多細(xì)菌以及酶母菌等生物中。質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌（細(xì)胞）___________外（即擬核DNA）之外，具有_________________的雙鏈______________________分子。質(zhì)粒上有決定____________________________________的基因（可作為標(biāo)記基因）。2

6、、作為運(yùn)載體的特點(diǎn)：1）、有______________________________；2）、能進(jìn)行________________________；3）、有標(biāo)記基因、如抗四環(huán)素、氨芐青霉素等______________，供重組DNA的鑒定和選擇。4）、_________________________________________；3、使用的載體除質(zhì)粒外，還有____________________________________

7、___等。［例［例題分析］分析］例1、下列關(guān)于限制酶的說法正確的是（）A、限制酶廣泛存在于各種生物中，但微生物中很少B、一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列C、不同的限制酶切割DNA后都會(huì)形成黏性末端D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵例2、以下是兩種限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答問題。(1)其中①和是由一種限制酶切割形成的末端，兩者要重組成一個(gè)DNA分子，所用DNA連接酶通常是。(2)和是由另一種限制酶切割形成的末端，

8、兩者要形成重組DNA片段，所用DNA連接酶通常是。［隨堂［隨堂練習(xí)練習(xí)］1、關(guān)于限制酶的說法中，正確的是（）A、限制酶是一種酶，只識(shí)別GAATTC堿基序列B、EcI切割的是G—A之間的氫鍵C限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD限制酶只存在于原核生物中2、DNA連接酶催化的反應(yīng)是()ADNA復(fù)制時(shí)母鏈與子鏈之間形成氫鍵B黏性末端堿基之間形成氫鍵C兩個(gè)DNA片段黏性末端之間的縫隙的連接DA、B、C都不正確3、作為基因的運(yùn)輸工