離心方法的選用

1、離心方法的選用離心方法的選用所分離的顆粒大小和密度相差較大所分離的顆粒大小和密度相差較大:常速、高速離心常速、高速離心若從樣品液若從樣品液中分離中分離2種以上大小和密度不同的顆粒：差速離心種以上大小和密度不同的顆粒：差速離心超速離心超速離心:差速離差速離心法和密度梯度離心法，后者又分速率區(qū)帶離心和等密度離心。心法和密度梯度離心法，后者又分速率區(qū)帶離心和等密度離心。1、差速離心差速離心采用不同離心速度與時(shí)間，使不同沉降速度的顆粒分批分離采

2、用不同離心速度與時(shí)間，使不同沉降速度的顆粒分批分離差速離心法：差速離心法：原理：采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使原理：采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的離心時(shí)間下分批分沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度及不同的離心時(shí)間下分批分離的方法，稱為差速離心法。離的方法，稱為差速離心法。當(dāng)以一定離心力在一定的離心時(shí)間內(nèi)進(jìn)行離心時(shí)，在離心管底當(dāng)以一定離心力在一定的離心時(shí)間內(nèi)進(jìn)行

3、離心時(shí)，在離心管底部就會(huì)得到最大和最重顆粒的沉淀，分出的上清液在加上轉(zhuǎn)速下再部就會(huì)得到最大和最重顆粒的沉淀，分出的上清液在加上轉(zhuǎn)速下再進(jìn)行離心，又得到第二部分較大、較重顆粒的進(jìn)行離心，又得到第二部分較大、較重顆粒的“沉淀沉淀”及含小和輕及含小和輕顆粒顆?！吧锨逡荷锨逡骸?，如此，多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較，如此，多次離心處理，即能把液體中的不同顆粒較密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶密度梯度液中形成若干條界面清楚的不連

4、續(xù)區(qū)帶可用來分離核酸、蛋白質(zhì)、核糖體亞基及其它成分?？捎脕矸蛛x核酸、蛋白質(zhì)、核糖體亞基及其它成分。3、等密度離心等密度離心原理：當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在離心力場(chǎng)下，在密度原理：當(dāng)不同顆粒存在浮力密度差時(shí)，在離心力場(chǎng)下，在密度梯度介質(zhì)中，顆粒或向下沉降，或向上浮起，一直移動(dòng)到與它們各梯度介質(zhì)中，顆?；蛳蛳鲁两?，或向上浮起，一直移動(dòng)到與它們各自的密度恰好相等的位置上形成區(qū)帶，從而使不同浮力密度的物質(zhì)自的密度恰好相等的位置上形成區(qū)帶，從

5、而使不同浮力密度的物質(zhì)得到分離得到分離區(qū)別區(qū)別:離心介質(zhì)、密度梯度范圍與密度梯度離心不同，欲分離的離心介質(zhì)、密度梯度范圍與密度梯度離心不同，欲分離的顆粒密度處于離心介質(zhì)密度范圍內(nèi)。顆粒密度處于離心介質(zhì)密度范圍內(nèi)。介質(zhì)有：氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。介質(zhì)有：氯化銫、硫酸銫、溴化銫、三碘苯衍生物等。操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時(shí)間離心。操作：介質(zhì)溶液與樣品液混合均勻，足夠時(shí)間離心。介質(zhì)梯度不需預(yù)先制備，離心時(shí)把密度均一的