低溫保護(hù)劑對(duì)4℃保存豬精液的活率影響

1、低溫保護(hù)劑對(duì)4℃保存豬精液的活率影響孫時(shí)軍1，朱華鴻2，陳曉峰3，俞頌東，李俊婷1，羅松1，馮夢(mèng)31.浙江省寧波市鄞州區(qū)畜牧獸醫(yī)站，浙江寧波，315100；2.浙江省寧波市鄞州區(qū)咸祥鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，浙江寧波，315141；3.浙江寧波福寧種豬有限公司，浙江寧波，315141；摘要：本實(shí)驗(yàn)采用1%濃度的甘油、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲亞砜作為精液低溫保護(hù)劑，通過(guò)精子降溫冷藏復(fù)蘇三個(gè)重要步驟，觀察第七天保護(hù)劑對(duì)精子活率的影響。結(jié)果表明：在4℃

2、下，乙二醇對(duì)精子活率保護(hù)作用最好，第7天仍能達(dá)到0.6以上，其次是甘油、二甲基乙酰胺和二甲亞砜組，空白對(duì)照組活率最低，低于0.2。關(guān)鍵字：低溫保護(hù)劑；豬精液；精子活率；復(fù)蘇家畜精液保存技術(shù)是二十世紀(jì)隨著人工授精技術(shù)廣泛應(yīng)用而產(chǎn)生的，原理是通過(guò)降低或抑制精子新陳代謝程度達(dá)到延長(zhǎng)精子在體外壽命的目的。為此，研究者試驗(yàn)將精液放在低溫狀態(tài)(非結(jié)冰)或冷凍(結(jié)冰)狀態(tài)下保存。精液低溫保存通常是在0～5℃范圍施行，這是在冷凍保存以前常用的方法。據(jù)報(bào)

3、道，在脫脂乳中加甘油10％～13％用于稀釋牛精液，在低溫下可保存14天仍具有很高的受精能力；在含有咖啡因6～10mg的脫離子緩沖溶液中保存牛精子，在6～7℃時(shí)，最長(zhǎng)能維持生存時(shí)間達(dá)519小時(shí)。低溫保存精液的局限性仍很大，當(dāng)冷凍保存技術(shù)成熟以后，已很少再使用和研究，另一方面，與牛精液相比，豬精液對(duì)低溫更敏感，因此，至今仍沒(méi)有成熟穩(wěn)定的低溫保存豬精液的方法。理論上來(lái)說(shuō)，低溫下精子代謝活動(dòng)水平更低，保存時(shí)間比常溫下長(zhǎng)的多。同時(shí)可應(yīng)用普通冰箱保

4、存，生產(chǎn)運(yùn)輸成本和操作技術(shù)與常溫精液基本相同，對(duì)于多數(shù)人工授精站無(wú)需增加設(shè)備及專業(yè)人員，則可較大副度地提升優(yōu)良種畜利用度，擴(kuò)展供精范圍，具有很廣的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)豬帶漿精液在4℃條件下，四種低溫保護(hù)劑對(duì)精子活率的影響進(jìn)行研究，以期為低溫保存精液探索可行之路。1.材料及方法1.1精液采集1作者簡(jiǎn)介：孫時(shí)軍，高級(jí)畜牧師，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物遺傳育種通訊作者：羅松，碩士研究生，主要研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)。郵箱：lsbjx@，電話：152582

5、20640基金項(xiàng)目：寧波市鄞州區(qū)農(nóng)業(yè)科研攻關(guān)項(xiàng)目0.6，和二甲亞砜及空白對(duì)照組差異顯著；二甲基乙酰胺組活率率高于0.5，和乙二醇、二甲亞砜及空白對(duì)照組差異顯著；二甲亞砜組精子活率約為0.4，和其他四組均差異顯著；空白組活率低于0.2，和其他四組均差異顯著。3.討論3.1豬精液低溫保存的可行性由于豬精子對(duì)低溫較馬和牛等其他家畜更為敏感，耐受能力差，容易發(fā)生冷休克等特點(diǎn)，使得豬精液低溫保存技術(shù)的研究進(jìn)展較為緩慢。DeIeeuw提出，隨著溫度

6、的降低，精子質(zhì)膜的磷脂由液相轉(zhuǎn)變?yōu)槟z相，使膜的通透性變強(qiáng)，導(dǎo)致精子內(nèi)部的陽(yáng)離子和酶外漏，及膜控制酶活性和擴(kuò)散能力的降低，致使精子的獲能、頂體反應(yīng)及死亡[1]。Ahhouse等研究發(fā)現(xiàn)，低于12℃，精子的存活時(shí)間和活率均急劇下降[2]。但Funahashia等在10℃條件下稀釋保存豬精液9天后，精子仍具有較高的活率和體外穿透卵子的能力[3]；徐振軍等用糖類，卵黃和檸檬酸鈉配制的稀釋劑在4℃下保存精液，發(fā)現(xiàn)在6天后，活力仍高于0.5[4]；

7、本實(shí)驗(yàn)中，豬精液在4℃下保存7天仍然具有較高活動(dòng)，提示豬稀釋精液保存的溫度界限可以降低。3.2不同低溫保護(hù)劑對(duì)精子活率的影響龍翔等使用甘油、乙二醇和二甲亞砜作為冷凍保護(hù)劑，通過(guò)液氮熏蒸法冷凍豬精液，解凍后觀察精子活率，發(fā)現(xiàn)二甲亞砜對(duì)精子的毒性最大[5]，與本實(shí)驗(yàn)中二甲亞砜組在個(gè)處理組中精子活率最低結(jié)果類似。甘油組和乙二醇組對(duì)精子保護(hù)作用最好，本實(shí)驗(yàn)得出相同結(jié)論。李兆華等在豬精液中加入牛血清白蛋白作為冷凍保護(hù)劑，發(fā)現(xiàn)第7天的精子活率仍可達(dá)