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1、多肽類化合物廣泛存在于自然界中,其中對(duì)具有一定生物活性的多肽的研究,一直是藥物開發(fā)的一個(gè)主要方向。80年代中期至今多肽化學(xué)合成技術(shù)有很大發(fā)展,合成的成品一般是以目標(biāo)多肽為主的幾種結(jié)構(gòu)相似多肽的混合物,對(duì)多肽混合物的分離分析及純度鑒定一直是一個(gè)重要問題。本文主要介紹本人在分析多肽類化合物過程中的一些心得和經(jīng)驗(yàn).首先,在色譜柱選擇方面,因?yàn)槎嚯牡姆肿恿枯^大(一般在幾千到幾萬),分子量在10000左右的,常用的C18柱分離效果不太好,要選用碳
2、鏈比較短的色譜柱,如:C8或者C4;填料孔徑不能選普通的100埃,要選孔徑比較大的如300埃等。分子量在幾萬或者幾十萬的,可以選體積排阻色譜,用凝膠色譜柱。其次,在用反相色譜柱時(shí),因?yàn)槎嚯氖怯砂被峤M成的,流動(dòng)相選擇一般用含0.1%的三氟乙酸水和含0.1%的三氟乙酸乙腈的梯度洗脫。但因?yàn)槎嚯念惢衔锏淖贤馕蛰^弱,檢測(cè)波長(zhǎng)一般選在200~210nm左右,所以空白梯度的基線會(huì)往上漂移很多,特別是樣品濃度比較小的時(shí)候,分析誤差較大??紤]乙腈
3、的本底吸收比水大,在梯度洗脫過程中,隨著乙腈比例的增大,基線會(huì)向上漂。因此把乙腈中的三氟乙酸濃度降為0.05%~0.07%(可以隨梯度不同選不同濃度),通過兩者紫外吸收的抵消,基線變得平穩(wěn)很多,同時(shí)能增加檢測(cè)的靈敏度,使分析更靈敏、更準(zhǔn)確。第三,合成的多肽中的雜質(zhì)一般與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)相似,極性相差無幾,分離難度較大,在選擇洗脫梯度時(shí)要細(xì)心一點(diǎn),多做一些試驗(yàn),最好要做主峰的純度掃描,盡量把雜質(zhì)完全分開,對(duì)于難分離的多肽,可以選長(zhǎng)一點(diǎn)的色譜柱或者
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