產(chǎn)β -葡萄糖苷酶菌株的篩選鑒定及亞麻籽餅粕脫毒工藝的研究.pdf

1、亞麻（Linum usitatissimum L）為油料作物，其種子稱為亞麻籽。亞麻籽經(jīng)過壓榨取油后的副產(chǎn)物為亞麻籽餅粕，亞麻籽餅粕因其中富含蛋白類物質，不飽和脂肪酸，纖維素和其他有益成分等被廣泛應用于畜牧業(yè)生產(chǎn)，農(nóng)業(yè)和食品添加劑領域?？梢妬喡樽严盗械纳罴庸O具開發(fā)前景。雖然亞麻籽餅粕中含有不同類的有益因子，但其中還含有其他的抗營養(yǎng)因子，比如VB6拮抗物，亞麻籽膠，亞麻亭，粗纖維，胰蛋白酶抑制因子，植酸，生氰糖苷等。尤其生氰糖苷，它會在

2、動物體內(nèi)相關水解酶的作用下代謝成氫氰酸，引起動物細胞內(nèi)中毒，從而極大限制了亞麻籽餅粕的應用范圍，只能限量添加到HCN耐受的反芻動物飼料中。因此，要使亞麻籽餅粕的應用領域進一步擴大和加深，生氰糖苷的脫除就成為了亟待解決的問題。
　　研究表明，β-葡萄糖苷酶具有降解生氰糖苷的作用，能夠把生氰糖苷轉化為氰根離子。已有研究報道利用天然存在的，能夠產(chǎn)生β-D-葡萄糖苷酶的細菌來降解木薯中的生氰糖苷，也有報道把人β-葡萄糖苷酶基因（Glu）利

3、用基因工程技術導入到酵母菌中構建獲得工程菌，用該工程菌對亞麻籽進行處理后發(fā)現(xiàn)氰苷類物質降解顯著。另外，對比物理和化學方法，用生物學方法處理植物中的生氰糖苷具有條件溫和，能耗低，操作簡便，無試劑殘留的優(yōu)點，預計具有很廣闊的開發(fā)前景。
　　未做處理的亞麻籽餅粕可以作為飼料添加劑少量添加到反芻動物（牛）日常飲食中，且反芻動物未表現(xiàn)出不良反應。推測，長期食用亞麻籽餅粕的牛的腸道，經(jīng)過馴化作用，其中很有可能存在降解生氰糖苷的菌株。另外，β-

4、葡萄糖苷酶可以降解七葉苷為七葉素，七葉素能與Fe3+發(fā)生顯色反應而呈現(xiàn)黑色。本項研究以長期食用未做處理亞麻籽餅粕的牛的糞便為菌群來源，以含有七葉苷和三價鐵離子的培養(yǎng)基作為目的菌株的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)過初篩和復篩過程，從中分離出了五株高產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株。分子生物學結合形態(tài)學，生理生化表征鑒定得出這五株菌分別為Geotrichum candidum，Lichtheimia ramose，Citrobacter freundii，

5、Providencia rettgeri，Proteus vulgaris。采用p-NPG法對五株目的菌株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的酶活力進行了定量測定，結果顯示五株菌中Geotrichum candidum（M-1）的產(chǎn)酶活力是最高的，可以達到3.55U.ml-1。整體來看，真菌的產(chǎn)酶活力要顯著高于細菌的產(chǎn)酶活力。通過對比發(fā)酵脫毒結果，發(fā)現(xiàn)菌株Lichtheimia ramose（M-2）脫毒率最高。以M-2作為初始發(fā)酵菌株，以脫毒率和粗蛋白