4尿液蛋白測定

1、1標(biāo)題標(biāo)題：尿液蛋白：尿液蛋白測定版本號：版本號：A修訂號：號：0文件文件編號：號：HRYYSOPLJ04發(fā)布日期：布日期：2010年06月06日生效日期：生效日期：2010年07月01日發(fā)布部布部門：管理：管理層編制人：制人：張麗張麗君審核人：核人：張麗張麗君批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)人：錢曉偉錢曉偉頁碼頁碼：第：第1頁，共5頁尿液蛋白定性尿液蛋白定性試驗試驗1檢驗檢驗?zāi)康哪康恼Ｇ闆r下，腎小球濾過膜的孔徑屏障及電荷屏障使只有相對分子質(zhì)量低于700

2、00、主要帶正電荷的蛋白質(zhì)可濾入原尿中，而近端腎小管通過胞飲作用可重吸收原尿中的蛋白質(zhì)。由于蛋白質(zhì)的腎小管最大重吸收率極低，一旦腎小球濾過增高或腎小管分泌增多，就使腎小管蛋白質(zhì)重吸收達到飽和，從而形成蛋白尿。因此檢查尿液蛋白含量變化對腎臟疾病的診斷，觀察疾病的變化及治療效果具有重要參考價值。2檢測檢測原理原理尿液蛋白定性測定方法主要有干化學(xué)法、加熱醋酸法和磺基水楊酸法。干化學(xué)法測定尿液蛋白的原理是在一定的條件下(pH為3.2時)，溴酚藍

3、產(chǎn)生出陰離子，與帶陽離子的蛋白質(zhì)(主要是白蛋白)結(jié)合發(fā)生顏色變化。加熱醋酸法測定尿液蛋白的原理是加熱煮沸可使蛋白質(zhì)凝固變性，加酸使尿pH接近蛋白質(zhì)等電點(pH5左右)時，有利于變性蛋白質(zhì)的沉淀。磺基水楊酸法測定尿液蛋白的原理是磺基水楊酸是一種生物堿試劑，在略低于蛋白質(zhì)等電點的酸性環(huán)境下，其磺柳酸根陰離子可與蛋白質(zhì)的氨基酸殘端陽離子相結(jié)合，成為不溶性的蛋白鹽而沉淀。3標(biāo)本3.1收集患者清晨新鮮尿液10ml。3.2標(biāo)本采集后應(yīng)立即送到臨床檢

4、驗科體液檢驗室。3.3不能及時測定的標(biāo)本應(yīng)于2℃～8℃冰箱保存。4設(shè)備設(shè)備和試劑試劑4.1干化學(xué)法：羅氏公司的itronJuniⅡ尿液分析儀(主機號：8102061)及專用試帶。4.2加熱醋酸法：5%醋酸溶液；50%醋酸溶液；飽和氯化鈉溶液。4.3磺基水楊酸法：100gL磺基水楊酸乙醇溶液：取磺基水楊酸20g，加水至100ml，取此溶液與等量95%乙醇或甲醇液混合。3標(biāo)題標(biāo)題：尿液蛋白：尿液蛋白測定版本號：版本號：A修訂號：號：0文件文

5、件編號：號：HRYYSOPLJ04發(fā)布日期：布日期：2010年06月06日生效日期：生效日期：2010年07月01日發(fā)布部布部門：管理：管理層編制人：制人：張麗張麗君審核人：核人：張麗張麗君批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)人：錢曉偉錢曉偉頁碼頁碼：第：第3頁，共5頁有絮片狀沉淀；極強陽性(4)：絮狀混濁，有大凝塊下沉。7質(zhì)量控制量控制干化學(xué)法每天操作過程中應(yīng)使用自配的尿液質(zhì)控液至少做一次質(zhì)量控制。請參見itronJuniⅡ尿液分析儀儀器登記文件。加熱醋酸法

6、和磺基水楊酸法試驗過程中應(yīng)分別做一次陰性、陽性對照。8干擾因素因素尿液標(biāo)本必須新鮮，變質(zhì)的尿液會使尿pH發(fā)生變化，或者尿液本身過酸、過堿都會影響實驗結(jié)果。當(dāng)病人服用奎寧、奎寧丁和嘧啶等藥物時，引起尿液呈強堿尿(pH≥9.0)，超過了試劑帶本身的緩沖能力，會使干化學(xué)法出現(xiàn)假陽性結(jié)果；而用磺柳酸法和加熱醋酸法做尿蛋白定性時，因尿液過堿遠離蛋白質(zhì)的等電點出現(xiàn)假陰性結(jié)果。不同的尿蛋白測定方法對病人尿液內(nèi)不同類型蛋白質(zhì)檢測的敏感性不同，測定結(jié)果也

7、不相同。經(jīng)實驗證實尿中球蛋白濃度為4000mgL以下時，干化學(xué)法蛋白定性為陰性，只當(dāng)其濃度達5500mgL時，才出現(xiàn)可疑反應(yīng)；白蛋白、球蛋白比值為1:2的蛋白尿，蛋白濃度高達2000mgL時才會出現(xiàn)陽性()反應(yīng)，干化學(xué)法測量球蛋白的敏感性僅是白蛋白的1100～150。磺柳酸定性法對球蛋白反應(yīng)的靈敏度亦較白蛋白低，濃度同時為2000mgL時，白蛋白出現(xiàn)陽性()反應(yīng)，球蛋白僅為陽性()反應(yīng)；在白蛋白、球蛋白尿中，球蛋白比例增大，則陽性程度減

8、弱。加熱醋酸定性法和雙縮脲定量法可以對白蛋白、球蛋白顯示同樣的敏感性多種物質(zhì)(多為藥物)可使尿蛋白不同檢查方法呈現(xiàn)出假陽性和假陰性結(jié)果。尿液中青霉素濃度達到一定濃度時，可對磺柳酸法產(chǎn)生假陽性；對干化學(xué)法產(chǎn)生假陰性。除此之外，尿中含有高濃度有機碘造影劑(如膽影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸鹽時，磺柳酸法可呈假陽性，而對干化學(xué)和加熱醋酸法影響較小。為避免因鹽類析出所致假性混濁，因此操作時必須遵照“加熱→加酸→再加熱”的程序，以保證檢出微量蛋