廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-秀麗隱桿線蟲感染模型的構(gòu)建及其在抗菌中藥篩選中的應(yīng)用.pdf

1、目的：鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii，A.baumannii）生命力強(qiáng)，耐藥性嚴(yán)重，呈現(xiàn)世界流行趨勢，已經(jīng)成為我國臨床最常見的致病菌之一。然而，抗生素的研發(fā)速度滯后于細(xì)菌的耐藥速度，出現(xiàn)無藥可用的局面，針對此情況，各國關(guān)于鼓勵開發(fā)抗生素的優(yōu)惠政策相繼出臺，希望通過此措施進(jìn)一步加速抗生素研發(fā)的速度。因此抗生素研發(fā)不僅意義重大，也符合國際藥物研發(fā)趨勢。本課題擬構(gòu)建廣泛耐藥鮑曼不動桿菌（Extensively d

2、rug-resistant Acinetobacter baumannii, XDR A.baumannii）-秀麗隱桿線蟲感染模型，并利用該模型篩選清熱解毒中藥提取物，以期能夠?qū)ふ业娇乖摼闹兴幪崛∥铩?br>　　方法：
　　1．選用XDR A.baumannii臨床菌株GZLC-1作為致病菌，glp-4(bn2ts); sek-1(km4)秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans, C.elegans）作為模

3、型動物，構(gòu)建廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-秀麗隱桿線蟲感染模型。通過比較線蟲在M9緩沖液、10％BHI-M9、20%BHI-M9、BHI等幾種液體培養(yǎng)基中存活時間，確定最適比例的液體培養(yǎng)基。為了增強(qiáng)A.baumannii的致病性，進(jìn)一步優(yōu)化了鐵離子在液體培養(yǎng)基的加入量。最后確定該感染模型液體培養(yǎng)基的組成成分。
　　2．比較不同感染時長下線蟲的存活時間，確定線蟲的最佳感染時長。在最佳感染時長下進(jìn)一步確定最佳感染菌濃度和治療時長。
　　

4、3．分別用水，50%乙醇，95%乙醇三種溶劑對28味清熱解毒中藥進(jìn)行回流提取，藥液比是1:10，提取兩次，每次一小時，提取液合并，放在水浴鍋上干燥后制成粉末后放置4℃冰箱待用。
　　4．采用廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-線蟲感染模型對中藥提取物進(jìn)行篩選，每種提取物配成1000μg/ml，100μg/ml,10μg/ml,1μg/ml,0.1μg/ml五個濃度進(jìn)行藥效篩選實驗，同時設(shè)陰性對照（1%DMSO）和陽性對照（1%DMSO溶解2μg

5、/ml多粘菌素B）。
　　5.選取體內(nèi)抗A.baumannii效果較好的中藥提取物進(jìn)行體外藥敏實驗，比較中藥提取物在體內(nèi)與體外的抗A.baumannii效果。
　　結(jié)果：
　　1、廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-秀麗隱桿線蟲感染模型培養(yǎng)基組成成分是10%BHI-M9、5μg/ml萘啶酸、10μM FeCl3、1%DMSO。
　　2、廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-秀麗隱桿線蟲感染模型感染時長是6h，感染菌濃度是5×105CFU/ml

6、，治療時長是24h。
　　3、線蟲體內(nèi)抗A.baumannii效果較好的提取物（與陰性對照組相比存活率提高到4.5倍以上）有黃芩、大青葉、牡丹皮、雞骨草、何首烏、山豆根等六味中藥的水提取物。4、黃芩、大青葉、牡丹皮、雞骨草、何首烏、山豆根等六味中藥的水提取物對XDR A.baumannii GZLC-1的MIC值皆大于2048μg/ml。
　　結(jié)論：
　　1、本實驗利用臨床XDR A.baumannii GZLC-1，

7、建立了廣泛耐藥鮑曼不動桿菌-線蟲感染模型，并證實線蟲的死亡是由于XDR A.baumannii在線蟲體內(nèi)定殖且不斷繁殖導(dǎo)致。
　　2、黃芩、大青葉、牡丹皮、雞骨草、何首烏、山豆根等六種中藥水提取物對感染了XDR A.baumannii的線蟲具有較好的治療作用。
　　3、黃芩、大青葉、牡丹皮、雞骨草、何首烏、山豆根等六種中藥水提取物體外抗XDR A.baumannii GZLC-1的效果較差，但體內(nèi)藥效結(jié)果較好，說明這六種提取