獸醫(yī)生物制品學(xué)第八章獸用疫苗生產(chǎn)與質(zhì)量控制

1、疫苗生產(chǎn)工藝介紹,疫苗生產(chǎn)基本條件疫苗生產(chǎn)工藝流程生產(chǎn)中影響疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)疫苗抗原制造技術(shù)介紹疫苗檢驗(yàn)疫苗保存,1、疫苗生產(chǎn)基本條件,產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào)菌（毒）種疫苗《制造及檢驗(yàn)規(guī)程》GMP廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備,產(chǎn)品批準(zhǔn)文號(hào),農(nóng)業(yè)部頒發(fā)批準(zhǔn)文號(hào)GMP證書(具備該疫苗生產(chǎn)線)產(chǎn)品復(fù)核檢驗(yàn)(具備生產(chǎn)該疫苗的能力)標(biāo)簽、說明書樣稿審查(符合規(guī)程規(guī)定)省級(jí)文號(hào)？,菌 （毒）種,菌（毒）種是疫苗生產(chǎn)必備的原材料，國(guó)家對(duì)菌（毒

2、）的保管和使用有嚴(yán)格的規(guī)定和限制（生物安全問題）。生產(chǎn)疫苗的菌（毒）種來源：中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或新獸藥轉(zhuǎn)讓單位。菌（毒）種保管和使用：基礎(chǔ)種毒由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或其委托的保管單位進(jìn)行生產(chǎn)、鑒定和保管，生產(chǎn)用種子批由企業(yè)生產(chǎn)、鑒定和保管。,菌 （毒）種分類,菌（毒）種分強(qiáng)毒和弱毒強(qiáng)毒：通常指從得病動(dòng)物體內(nèi)分離到的致病毒株，只能用于制造滅活疫苗和檢驗(yàn)用弱毒：通常是采用人工的方法用強(qiáng)毒致弱而成，一般于制造活疫苗,菌 （毒）種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

3、,生物學(xué)特性明顯、歷史清楚：形態(tài)、培養(yǎng)特性、生化特性及血清免疫學(xué)特性等明顯，易于鑒別；人工感染動(dòng)物引起穩(wěn)定一致的臨床癥狀和病理變化特征；原始細(xì)菌或病毒株的來源地區(qū)、動(dòng)物品種流行資料清楚；分離鑒定資料完整；傳代、保藏和生物學(xué)特性檢查方法明確。遺傳學(xué)上相對(duì)純一與穩(wěn)定：菌毒種在傳代增殖過程中某些遺傳形狀會(huì)發(fā)生改變和分離，如形態(tài)特征、毒力、反應(yīng)原性、免疫原性等方面，因此要求制造生物制品的菌（毒）種的這種改變和分離越小越好，應(yīng)經(jīng)常進(jìn)行挑選，純化

4、和克隆。,,反應(yīng)原性和免疫原性優(yōu)良：反應(yīng)原性高，即使微量量的抗原物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體內(nèi)既能產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，血清學(xué)上會(huì)出現(xiàn)很高的特意性；優(yōu)良的免疫原性物質(zhì)能使免疫動(dòng)物產(chǎn)生完善的免疫應(yīng)答，從而獲得堅(jiān)強(qiáng)的免疫力毒力應(yīng)在規(guī)定的范圍以內(nèi)：用于制造弱毒疫苗的菌毒種，毒力應(yīng)盡量弱一些；用于制造抗血清、滅活疫苗和疫苗效力檢測(cè)的菌（毒）種毒力應(yīng)強(qiáng)，且抗原性要盡量高,菌（毒）種的篩選程序和內(nèi)容,,,,弱毒菌（毒）種的選育,疫苗《制造及檢驗(yàn)規(guī)程》,任何一種疫苗

5、都有其《制造及檢驗(yàn)規(guī)程》，它是國(guó)家法定標(biāo)準(zhǔn)。疫苗的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按《規(guī)程》規(guī)定的方法進(jìn)行生產(chǎn)和檢驗(yàn)，若要改變方法，則要提供研究材料證明是可行的，并報(bào)農(nóng)業(yè)部評(píng)審批準(zhǔn)，形成新《規(guī)程》才能進(jìn)行生產(chǎn)。《規(guī)程》來源中華人民共和國(guó)《獸用生物制品規(guī)程》（常規(guī)疫苗）轉(zhuǎn)讓單位（新獸藥）,廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備,《GMP》證書是疫苗生產(chǎn)的準(zhǔn)入證， 疫苗生產(chǎn)必需擁有與生產(chǎn)工藝相符合的生產(chǎn)線 GMP 生產(chǎn)車間設(shè)計(jì)要求功能區(qū)：抗原制備區(qū)、成品生產(chǎn)區(qū)、洗滌

6、區(qū)、辦公區(qū)。各區(qū)域和功能間以潔凈走廊相連，嚴(yán)格按人流物流分開原則進(jìn)行設(shè)計(jì)。潔凈度：按各功能間潔凈度、壓力、壓差要求設(shè)計(jì)施工。有10萬級(jí)區(qū)、萬級(jí)區(qū)和局部百級(jí)區(qū)。六大系統(tǒng)：供電、供水、供汽、污水處理、凈化、監(jiān)控。,廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備,檢驗(yàn)設(shè)施質(zhì)檢室檢驗(yàn)動(dòng)物舍（應(yīng)配備有符合各類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)別飼養(yǎng)設(shè)施）倉(cāng)儲(chǔ)設(shè)施原輔材料庫(kù)半成品庫(kù)成品庫(kù),廠房、設(shè)施和儀器設(shè)備,滅菌設(shè)備：高壓蒸氣滅菌柜、干熱箱、鍋爐等；凈化設(shè)備：凈化機(jī)組、無菌室、

7、超凈工作臺(tái)等；微生物培養(yǎng)設(shè)施設(shè)備：溫室、孵化器、細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)、各種罐體、生化培養(yǎng)箱等；乳化設(shè)備：各種罐體、膠體摸、高壓勻漿機(jī)等；凍干設(shè)備：凍干機(jī)；灌裝設(shè)備：洗烘連動(dòng)線、自動(dòng)灌裝加塞聯(lián)動(dòng)機(jī)；包裝設(shè)備：扎蓋機(jī)、帖標(biāo)機(jī)；冷藏冷凍設(shè)施設(shè)備：冷庫(kù)、冷柜、液氮罐等；污水廢棄物處理設(shè)施設(shè)備：滅菌柜、消毒罐、污水處理站；檢驗(yàn)儀器設(shè)施設(shè)備：各種顯微鏡、水分測(cè)定儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、動(dòng)物房等。,福州大北農(nóng)公司總體布局圖,,,,,

8、,,,,,,,,,,,,,疫苗生產(chǎn)工藝流程,菌（毒）種 培養(yǎng)物（培養(yǎng)基、動(dòng) 物、禽胚或細(xì)胞等） 收獲抗原（培養(yǎng)液、含毒組織、胚液或細(xì)胞液等） 配苗 分裝 凍干成活疫苗或滅活后制成滅 活疫苗。,,,,,,細(xì)菌疫苗的制造流程,蛋白胨、肉浸液等原料,,,,病毒性細(xì)胞疫苗的制造工藝流程,健康動(dòng)物（或胚胎）,,,,,,,病毒性組織疫苗的制造工藝流程,感染動(dòng)物或胚胎,分裝、扎蓋、

9、貼簽,,影響疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié),活疫苗生產(chǎn)用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效凍干保護(hù)劑的選擇和凍干曲線的制定是否合理滅活疫苗生產(chǎn)用菌（毒）種的制備是否優(yōu)良制苗用抗原制備（微生物增殖）是否高效抗原滅活是否徹底乳化工藝是否先進(jìn),疫苗抗原制造技術(shù)介紹,細(xì)菌類疫苗抗原增殖技術(shù)（培養(yǎng)基增殖）細(xì)菌培養(yǎng)是指細(xì)菌在動(dòng)物體外的人工培養(yǎng)基上以及人工控制的環(huán)境中（通常用培養(yǎng)罐進(jìn)行培養(yǎng)）生長(zhǎng)繁殖的過程。細(xì)菌性疫苗都

10、是利用培養(yǎng)基制造的，首先通過分離培養(yǎng)，獲得單個(gè)菌落，制備細(xì)菌種子，然后逐級(jí)培養(yǎng)進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。,,細(xì)菌類疫苗抗原增殖技術(shù)（關(guān)鍵控制點(diǎn)）培養(yǎng)基質(zhì)量：培養(yǎng)細(xì)菌類疫苗抗原的培養(yǎng)基一般是人工制備的一種液體培養(yǎng)基，它含有培養(yǎng)相應(yīng)細(xì)菌所需營(yíng)養(yǎng)成分，包括水、氮源、碳源、無機(jī)源和生長(zhǎng)因子等它的好壞直接影響到產(chǎn)菌量和檢驗(yàn)結(jié)果。,,生產(chǎn)用菌種菌落挑選符合細(xì)菌培養(yǎng)特性活菌含量符合要求純凈無污染代次按規(guī)定控制工藝的穩(wěn)定性培養(yǎng)條件工藝技術(shù)（各種參

11、數(shù)如種子接種量、培養(yǎng)時(shí)間、收獲時(shí)間等）,,傳統(tǒng)病毒類疫苗抗原增殖技術(shù)動(dòng)物增殖禽胚增殖細(xì)胞增殖,5、疫苗檢驗(yàn),活疫苗物理性狀（凍干苗） 無菌檢驗(yàn)（純粹檢驗(yàn)）鑒別檢驗(yàn)：特異性血清中和檢驗(yàn)。外源病毒檢驗(yàn)（病毒類疫苗）：中和法檢驗(yàn)?；罹?jì)數(shù)（細(xì)菌類疫苗）：平板計(jì)數(shù)。病毒含量測(cè)定（病毒類疫苗） ：EID50、ELD50或TCID50。,,安全檢驗(yàn)：動(dòng)物或雞胚（劑量幾倍至幾十倍）效力檢驗(yàn)：攻毒保護(hù)或微生物含量測(cè)定。水份測(cè)定（凍

12、干苗）：4%以內(nèi)。真空度測(cè)定（凍干苗）：白色、粉色或紫色輝光。,,滅活疫苗滅活檢驗(yàn)：半成品檢測(cè)：EID50、ELD50或TCID50 。物理性狀：外觀、劑型、穩(wěn)定性、粘度檢驗(yàn)。無菌檢驗(yàn)：培養(yǎng)基檢測(cè)安全檢驗(yàn)：動(dòng)物檢驗(yàn)效力檢驗(yàn)：攻毒保護(hù)或測(cè)抗體。滅活劑含量測(cè)定：化學(xué)分析,6、疫苗保存,疫苗對(duì)溫度極為敏感，保存不當(dāng)會(huì)使效價(jià)嚴(yán)重受損（尤其是活疫苗）或劑型破壞，并導(dǎo)致疫苗失效，因此應(yīng)嚴(yán)格在規(guī)定的條件下保存。,7、豬瘟活疫苗產(chǎn)品介紹,

13、種類：豬瘟活疫苗根據(jù)抗原制備途徑不同又分為：豬瘟活疫苗（成兔脾淋源）豬瘟活疫苗（乳兔源）豬瘟活疫苗（細(xì)胞源）豬瘟活疫苗（牛體源）疫苗研究和發(fā)展歷史背景,3.6豬瘟活疫苗產(chǎn)品介紹—生產(chǎn)和使用對(duì)比,豬瘟活疫苗質(zhì)量控制要素,菌毒種純凈（細(xì)菌和外源性病毒污染）含毒量高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)代次控制在5代以內(nèi)原材料的選擇組織苗家兔的選擇（兔種、年齡、體重、健康狀況等）乳兔的選擇（日齡、體重、健康狀況等）細(xì)胞苗細(xì)胞的選擇（無污染外

14、原病毒等）,豬瘟活疫苗質(zhì)量控制要素,生產(chǎn)環(huán)境控制 組織苗動(dòng)物飼養(yǎng)條件控制接毒后動(dòng)物反應(yīng)觀察與判斷生產(chǎn)線功能間潔凈級(jí)別要求 細(xì)胞苗細(xì)胞檢測(cè)（BVDV等）健康細(xì)胞和接毒后細(xì)胞的觀察與判斷生產(chǎn)線功能間潔凈級(jí)別要求半成品檢測(cè)成品檢測(cè),四、疫苗生產(chǎn)質(zhì)量控制,質(zhì)量控制意義質(zhì)量控制要求質(zhì)量控制保證措施（獸藥GMP管理）疫苗質(zhì)量評(píng)價(jià),1、質(zhì)量控制意義,國(guó)家強(qiáng)制要求 禽流感事件，人血白蛋白事件企業(yè)自身要求 品牌、效益、責(zé)任

15、 生物制品特殊性表現(xiàn)在在生產(chǎn)和使用過程中人和動(dòng)物的安全性（污染、混毒、人畜共患）對(duì)環(huán)境的安全性群體性危害,2、質(zhì)量控制要求,安全性：毒副作用、殘留、環(huán)境、人類有效性：有效成分達(dá)到要求，療效確切均一性：批間、最小單元間、貯存運(yùn)輸后等穩(wěn)定性：貯存期穩(wěn)定，有較長(zhǎng)的有效期方便性：給藥的方式、途徑經(jīng)濟(jì)性：在保證質(zhì)量的前提下，改進(jìn)生產(chǎn)工藝，提高效力，降低成本,3、保證措施——獸藥GMP管理,GMP是英文Good Manufact

16、uring Practice for Drugs的縮寫，直譯為“優(yōu)良產(chǎn)品的生產(chǎn)實(shí)踐”。我國(guó)的《獸藥GMP》是《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的簡(jiǎn)稱》。 《獸藥GMP》是在獸藥生產(chǎn)過程中，用科學(xué)、規(guī)范化的條件和方法來保證生產(chǎn)優(yōu)良獸藥的整套科學(xué)體系。它實(shí)施的目標(biāo)就是對(duì)獸藥生產(chǎn)的全過程進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證生產(chǎn)的獸藥質(zhì)量是合格優(yōu)良的。,3、保證措施——獸藥GMP背景,GMP是從藥品生產(chǎn)實(shí)踐中取得經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)的總結(jié)。人類社會(huì)經(jīng)歷了12次藥物災(zāi)難，特

17、別是20世紀(jì)出現(xiàn)的藥物災(zāi)難“反應(yīng)?！笔录?，公眾要求制定嚴(yán)格監(jiān)督法律；最早的GMP是由美國(guó)坦普爾大學(xué)6名教授編寫制定；1963年美國(guó)頒布第一部GMP，美國(guó)FDA經(jīng)過實(shí)施；1975年WHO正式公布GMP，開始向成員國(guó)推薦，并確定為WHO的法規(guī)之一，迄今為止有100多個(gè)國(guó)家實(shí)施了GMP；我國(guó)醫(yī)用藥品從1982年開始頒布GMP，農(nóng)業(yè)部于己于1989年頒布并決定實(shí)施GMP，規(guī)定至2005年12月31日未取得《GMP合格證》的企業(yè)，不得進(jìn)

18、行藥品生產(chǎn)。,3、保證措施——控制要求,,,,,,,生產(chǎn)、管理人員,廠房、設(shè)施、設(shè)備,原料、包裝材料,生產(chǎn)方法,檢驗(yàn)、監(jiān)控,售后服務(wù),經(jīng)檢驗(yàn)合格的,經(jīng)過驗(yàn)證的,可靠的,完善的,經(jīng)驗(yàn)證合適的,訓(xùn)練有素的,,,,,GMP,,基本控制要求,影響質(zhì)量的因素,完善的,管理文件,,3、保證措施——控制要求,在GMP管理要求中，3條主線貫穿全過程生產(chǎn)處處防污染：原材料或產(chǎn)品被微生物或外來物攙雜、玷污、混雜、失真、遺漏、任意等造成產(chǎn)品的質(zhì)量問題，生產(chǎn)

19、過程對(duì)環(huán)境和人員的安全性：事物件件有驗(yàn)證：能證明任何程序、生產(chǎn)過程、設(shè)備、物料、活動(dòng)或系統(tǒng)能導(dǎo)致預(yù)期結(jié)果，有文件證明的行動(dòng)。凡是須問個(gè)為什么？怎么樣？好不好？行不行？----通過驗(yàn)證----放心使用工作一律守制度：有一項(xiàng)工作或活動(dòng)就必須有一項(xiàng)制度；有制度就必須執(zhí)行；有執(zhí)行就必須有綜合（分析、檢查）；有綜合就有提高（改進(jìn)、修訂）,3、保證措施——管理軟件,軟件：是指企業(yè)對(duì)管理體系中采用的全部要素、要求和規(guī)定編制成各種制度、標(biāo)準(zhǔn)和程序形

20、成文件系統(tǒng)，在實(shí)施中及時(shí)正確地記錄執(zhí)行情況且保存完整的執(zhí)行記錄。從組織架構(gòu)、工作標(biāo)準(zhǔn)到記錄（憑證）等都進(jìn)行了詳細(xì)的制定，它是質(zhì)量控制的重要保證。,3、保證措施—過程控制方法,過程控制方法：監(jiān)督加檢查（檢驗(yàn)）人員（培訓(xùn)、技能等）原輔材料（供應(yīng)商評(píng)估、小樣實(shí)驗(yàn)、檢驗(yàn) ）設(shè)備儀器定期驗(yàn)證和校驗(yàn)生產(chǎn)過程監(jiān)督和檢查（半成品檢驗(yàn)）產(chǎn)品檢驗(yàn)（企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)）批記錄核查、批簽發(fā)售后服務(wù)（運(yùn)輸、保存、使用注意事項(xiàng)、客戶訪問、退回產(chǎn)品的處理、不

21、良反應(yīng)的處理等）,3、保證措施——過程控制目標(biāo),控制管理目標(biāo)把影響產(chǎn)品質(zhì)量的人為差錯(cuò)，減少到最低程度防止一切對(duì)產(chǎn)品的污染、交叉污染和產(chǎn)品質(zhì)量下降的情況發(fā)生建立完善的質(zhì)量保證體系，確保GMP的有效實(shí)施 產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣取決于企業(yè)的質(zhì)量觀是否保證GMP的有效實(shí)施,四、疫苗質(zhì)量評(píng)價(jià),生產(chǎn)過程評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)安全性效力穩(wěn)定性臨床使用效果評(píng)價(jià)（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)差異）自家苗？,五、疫苗研究發(fā)展方向,傳統(tǒng)疫苗改進(jìn)精制化（

22、減少副反應(yīng)）；規(guī)模化（改進(jìn)工藝、提高產(chǎn)能、降低成本）；耐熱化（有利于保存和運(yùn)輸）；多聯(lián)多價(jià)化（減少動(dòng)物應(yīng)激）；高效化（改進(jìn)疫苗質(zhì)量，提高內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，增強(qiáng)疫苗免疫效果，如種毒的改造、佐劑的運(yùn)用等）。,,新型疫苗研發(fā)：以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)，研究新型疫苗是新世紀(jì)疫苗研究的主導(dǎo)方向。新病（包括變異）疫苗研發(fā)：企業(yè)與科研單位聯(lián)合開發(fā)已成為趨勢(shì)，一些企業(yè)成立的研發(fā)部門也在從事基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用研究，為生產(chǎn)出高質(zhì)量的疫苗奠定了基礎(chǔ),,謝謝！