中草藥添加劑在水產(chǎn)動(dòng)物中的研究進(jìn)展

1、中草藥添加劑在水產(chǎn)飼料中的研究進(jìn)展——水生生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室第四期讀書報(bào)告,報(bào)告人：王小娜指導(dǎo)老師：趙玉蓉,報(bào)告內(nèi)容：,一、中草藥添加劑在水產(chǎn)飼料中的研究進(jìn)展二、實(shí)驗(yàn)安排及部分實(shí)驗(yàn)用中草藥的功效簡介三、目前的實(shí)驗(yàn)進(jìn)展（已測定完成的指標(biāo)）四、后續(xù)工作,一、中草藥添加劑在水產(chǎn)飼料中的研究進(jìn)展,Concept,Concept,中草藥作為飼料添加劑中的綠色產(chǎn)品，具有天然、高效、毒副作用小，抗藥性不顯著、資源豐富以及性能多樣性等特點(diǎn)。

2、在提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和飼料利用率的同時(shí)，又能充分保證人體的健康，兼有藥性和營養(yǎng)性雙重作用，是化學(xué)合成飼料添加劑不可比擬的。因此，以中草藥替代抗生素的添加劑將越來越受到人們的關(guān)注，它的應(yīng)用也會(huì)更加廣泛。,中草藥添加劑是由不同性味功能的中草藥根據(jù)中獸醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)理論配制而成，由于其種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，成分多樣，因此，不同的中草藥添加劑其作用也不相同。有研究表明，中草藥不但含有大量的生物堿、揮發(fā)油、苷類、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、多糖及多種免疫活

3、性物質(zhì)和一些未知的促生長活性物質(zhì)，還含有一定量的蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物質(zhì)、維生素、油脂、植物色素等營養(yǎng)物質(zhì)。這些成分可以促進(jìn)機(jī)體代謝和蛋白質(zhì)及酶的合成，從而加速水產(chǎn)動(dòng)物的生長發(fā)育，提高餌料轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)體質(zhì)，降低發(fā)病率和死亡率。,1、中草藥添加劑的作用(1)提高生產(chǎn)性能，降低餌料系數(shù)水產(chǎn)動(dòng)物同其它動(dòng)物一樣，對餌料的色，香、味等都有感官上的要求。為了促進(jìn)動(dòng)物的采食，提高生產(chǎn)性能及餌料利用率、縮短養(yǎng)殖周期，有必要在飼料中添加一些這方面

4、的物質(zhì)。陳斐等于1991年在鯉魚的飼料中添加2%的含有蒲公英，倉術(shù)、茴香等10多種中草藥配伍的添加劑，但多種維生素的添加量小于常量，對鯉魚的生長和產(chǎn)量沒有影響，說明中草藥含有比較豐富的維生素。,(2)增強(qiáng)體質(zhì)，防治疾病由于中草藥本身具有消除和抑制自由基的生成及提高自由基酶類活性的作用，并含有各種微量元素，因此對防治疾病有一定的效果。掘報(bào)道，有200多種中草藥有殺菌、抑菌作用;有130多種中草藥能抗菌;有50多種中草藥對病毒有滅活或抑制

5、作用。,(3)改善水產(chǎn)品的品質(zhì)根據(jù)資料記載，魚、蝦長期攝食含有大蒜粉的餌料，其肉質(zhì)變得細(xì)嫩，肉味更香濃。日本大學(xué)藥學(xué)部高橋教授用加入2.5%杜仲粉末(中國產(chǎn))的混合飼料喂養(yǎng)鱔魚，結(jié)果鱔魚蛋白膠厚度得到改善，肉質(zhì)烹調(diào)后味道可與野生鱔魚媲美。冀獻(xiàn)民用杜仲喂鰻魚，發(fā)現(xiàn)魚體肌肉細(xì)嫩、味番、脂肪含量適中，高級不飽和脂肪酸含量較多。,(4)其它一些作用中草藥除具有上述作用外，還具有：①誘食作用：童圣英等于1998年報(bào)道，山楂含有大量的有機(jī)酸，對

6、皺紋盤鮑具有明顯的誘食作用;實(shí)驗(yàn)證明，黃柏、繡球等對平均體長為8.Ocm的泥鰍有誘食作用;飼料中含0.25%陳皮的飼料對草魚的誘食效率最高，草魚咬餌次數(shù)和啄咬力分別為對照組的7.25倍和2.1倍。②防毒防腐作用：草藥中的香辛料及其精油中含有的抗菌成分，有不同程度的抗菌效力，特別是與化學(xué)防腐劑合用，其效果更佳，且不會(huì)影響水產(chǎn)動(dòng)物的攝食。,2、中草藥在應(yīng)用中存在的問題　　(1)科學(xué)配伍　　在進(jìn)行中草藥配方設(shè)計(jì)時(shí)要考慮：①中草藥的十八反、

7、十九畏的條件性配伍，特別是維生素、微量元素、氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)之間的協(xié)同與拮抗作用;②根據(jù)動(dòng)物不同生長階段、養(yǎng)殖條件及季節(jié)，適時(shí)進(jìn)行配方調(diào)整，以滿足動(dòng)物不同狀態(tài)的需要;③由于產(chǎn)地、季節(jié)、炮制方法等因素不同，同一種中草藥其成品的性能也會(huì)有所差異，出現(xiàn)同樣的配方卻產(chǎn)生不同效果，故要注意穩(wěn)定藥材的質(zhì)量。,(2)改進(jìn)加工工藝①加工方法。目前中草藥添加劑大多以原料粉碎后攪拌而成，這對于用量較大而有效成分較低的根皮類等木質(zhì)化程度較高的中草藥來說，要

8、保證其藥效，就必須大劑量的添加，這就增大了中草藥在日糧中的含量，其結(jié)果：一方面導(dǎo)致魚、蝦在同等攝食量的情況下攝入的營養(yǎng)物質(zhì)相對不足，另一方面也會(huì)破壞飼料的適口性，使水產(chǎn)動(dòng)物的采食量減少，直接影響動(dòng)物的正常生長。②加工的粉末大小與其有效成分的釋出及動(dòng)物的吸收也有很大關(guān)系。為了提高中草藥的效果，應(yīng)采取先進(jìn)的生產(chǎn)工藝(如浸提技術(shù))，向微量化、專用型方向發(fā)展，這樣既可保證其藥效，又不影響日糧的營養(yǎng)水平。,3、中草藥添加劑的發(fā)展前景　　我國中

9、草藥資源十分豐富，而且多生長于深山荒野，無農(nóng)藥污染，利用方便。由于中草藥有較好的防治疾病及一定的營養(yǎng)作用，對提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能和改善產(chǎn)品品質(zhì)均有很好的效果，且對人類健康無危害，所以認(rèn)為其性能優(yōu)于化學(xué)添加劑。　　由于中草藥的成分復(fù)雜，功效多樣，因此要應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段，加強(qiáng)單味中草藥和配伍性能的研究，尤其是在進(jìn)行中草藥添加劑配伍時(shí)，既要考慮動(dòng)物防病治病的作用，又要考慮其營養(yǎng)保健作用。制定規(guī)范的中草藥添加劑的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化，使相關(guān)的生產(chǎn)和研

10、究有章可循。另外，做添加劑的中草藥應(yīng)選用不與人用的珍貴藥材(如人參)競爭的廉價(jià)資源，否則就會(huì)增大成本，降低經(jīng)濟(jì)效益。,二、實(shí)驗(yàn)安排及部分實(shí)驗(yàn)用中草藥的功效簡介,“不同配伍的中草藥對鯽魚生產(chǎn)性能的影響”實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)了五個(gè)不同的中草藥配伍，其作用有降脂、促生長、抗感染、提高免疫力等，旨在篩選出效果最好的一組配方，應(yīng)用于以后的生產(chǎn)研究。五個(gè)中草藥配伍即為五個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，水循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)養(yǎng)殖8周之后，取樣對其生長、免疫等生理生化指標(biāo)進(jìn)

11、行測定。,2010年7月——11月 養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)2010年11月——2011年1月 分析實(shí)驗(yàn)2011年1月——3月 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析及文章的撰寫,1、茯苓：增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，茯苓多糖有明顯的抗腫瘤及保肝臟作用。2、熟地：對骨髓造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)均有一定的影響。3、牡丹皮：抗炎、抑菌及免疫增強(qiáng)等作用。4、山茱萸：對體液免疫有促進(jìn)作用，可加速血清抗體IgG、IgM形成。另外，還具有抗炎、抗菌、抗應(yīng)激、抗氧

12、化等功效。5、澤瀉：降血脂、保護(hù)肝臟。6、山藥：具有促進(jìn)干擾素生成和增加T 細(xì)胞數(shù)的作用。,7、車前草：具有抗病原微生物作用，對甲醛及右旋糖酐引起的炎性水腫, 有明顯的抑制作用。8、苧麻葉：散瘀消腫；解毒 。9、忍冬藤：抗菌、抗炎。10、黃芪：增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、增強(qiáng)造血功能，改善物質(zhì)代謝、增強(qiáng)性腺功能、抗應(yīng)激、延緩衰老等作用。黃芪還具有保肝、抗?jié)兊茸饔?。黃芪多糖和黃芪皂苷是其主要有效成分。11、黨參：調(diào)整消化系統(tǒng)功能

13、、抗?jié)?。增?qiáng)機(jī)體免疫功能、增強(qiáng)造血功能、抗應(yīng)激、抑制血小板聚集等作用。,12、首烏：促進(jìn)造血功能、增強(qiáng)免疫功能、降低血脂、保肝、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、對消化系統(tǒng)也具有一定的調(diào)節(jié)作用。13、夏枯草：對痢疾桿菌、傷寒桿菌、霍亂弧菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌和葡萄球菌、鏈球菌有抑制作用，抗菌譜較廣。14、冬瓜皮：富含蛋白質(zhì)、糖類、維生素C。,15、決明子：抗菌、降血脂、抗血小板凝集。16、車前子：降低膽固醇含量。17、山楂：降血脂。18

14、、麥芽：助消化、降血糖、抗真菌。19、麥冬：提高動(dòng)物的耐缺氧能力，調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)功能。20、綠茶：降脂助消化、抗菌解毒。21、荷葉：荷葉中的生物堿有降血脂作用，,三、目前的實(shí)驗(yàn)進(jìn)展（已測定的指標(biāo)）,1、免疫器官的重量1.1 頭腎體指數(shù)頭腎體指數(shù)= (頭腎重量/體重) @100%測算方法: 先稱量魚體重, 然后斷尾放血摘取頭腎, 生理鹽水稍加沖洗, 吸水紙吸干表面水分,立即稱重, 根據(jù)記錄數(shù)據(jù)上式計(jì)算。1.2 脾臟體指數(shù)脾臟

15、體指數(shù)= (脾臟重量/體重) @100%測算方法與同頭腎體指數(shù)相同。,2、免疫細(xì)胞的活性檢測2.1 紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)紅、白細(xì)胞的數(shù)量能夠反映機(jī)體的免疫水平。紅細(xì)胞稀釋液：NaCl 0.5gNa2SO4 2.5gHgCl2 0.25蒸餾水加至100ml計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)，10微升的抗凝血用紅細(xì)胞稀釋液稀釋200倍后計(jì)數(shù)。紅細(xì)胞數(shù)＝5個(gè)中方格的中細(xì)胞數(shù)的和×50×稀釋倍數(shù)（個(gè)/mm3）

16、,白細(xì)胞稀釋液： 冰醋酸 1.5ml 1%龍膽紫 1ml蒸餾水加至100ml計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，稀釋400倍后計(jì)數(shù)（具體稀釋倍數(shù)要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來確定）。白細(xì)胞數(shù)＝4個(gè)大方格數(shù)中細(xì)胞數(shù)的和×2.5×稀釋倍數(shù)（個(gè)/mm3）,2.2 白細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬百分比白細(xì)胞的吞噬活性與機(jī)體免疫狀況密切相關(guān), 為非特異性免疫重要指標(biāo)。白細(xì)胞吞噬指數(shù)( PI) = 100個(gè)多核型白細(xì)

17、胞中含菌總數(shù)/100吞噬百分比( PP) = 100個(gè)吞噬細(xì)胞中參與吞噬的細(xì)胞數(shù)/100) （1）吞噬源的制備將酵母菌接種在YPD液體培養(yǎng)基中，28—30℃震蕩培養(yǎng)48小時(shí)，離心集菌后，高溫滅活（加熱至80℃以上），最后將其濃度調(diào)整至1.0×108cells/ml（麥?zhǔn)媳葷岱ǎ?，備用?（2）吞噬活性的測定0.2ml抗凝血中加入0.1ml吞噬源，搖勻，在28℃的恒溫水浴鍋中孵育45min，每隔10min搖動(dòng)一次。取一滴

18、全血-酵母菌混合液于潔凈的載玻片上，推成薄血片，每個(gè)樣品3張，自然晾干后，加瑞氏-姬姆薩染液的A液400微升，染色1min，然后滴加B液800微升，讓其覆蓋于A液之上，后用洗耳球?qū)、B兩液吹勻，染色8—15分鐘，用蒸餾水洗去玻片上的染色液，自然晾干，用油鏡觀察記錄結(jié)果。,2.3 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 有顆粒細(xì)胞白細(xì)胞 無顆粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,嗜中性粒

19、細(xì)胞,單核細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,嗜堿性粒細(xì)胞,1、 血液、體液免疫成分檢測除了免疫細(xì)胞的活性之外，魚體內(nèi)其他一些指標(biāo)的變化也能夠反映其免疫狀況。如血清中的抗體效價(jià)，血清溶菌酶（LSZ）的活性、堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活性、超氧化物歧化酶（SOD）、酚氧化酶（MPO）、血清補(bǔ)體活性等等都可以作為評價(jià)魚體免疫功能的指標(biāo)。,四、后續(xù)工作,其中，溶菌酶又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中黏多糖的堿性酶。

20、主要通過破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β-1,4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂內(nèi)容物逸出而使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。,高等動(dòng)物的酸性磷酸酶（ACP）作為體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶, 在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝, 主要存在于各臟器、血細(xì)胞和骨髓中。在魚類免疫研究中,

21、 也測定組織器官或血清中的磷酸酶活性。磷酸苯二鈉法測定組織或血清中AKP或ACP活力, 定義為1 g組織蛋白或100mL血清在37 e 與底物作用15 min產(chǎn)生1mg酚為單位。,超氧化物歧化酶（SOD）活性與機(jī)體免疫水平密切相關(guān), 對于增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的防御功能和整個(gè)機(jī)體的免疫機(jī)能有重要作用, 常作為機(jī)體非特異免疫功能指標(biāo)。SOD活力定義為: 1 mL 反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50% 時(shí)所對應(yīng)的SOD的量為1個(gè)亞硝酸鹽單位。根據(jù)試驗(yàn)需要,

22、可以分別檢測總SOD(T2SOD)、銅鋅SOD ( ZnCu2SOD)和錳SOD(Mn2SOD）等。,補(bǔ)體是一類存在于人和脊椎動(dòng)物血清中協(xié)助免疫反應(yīng)的一組血清蛋白質(zhì)?？杀豢乖?抗體復(fù)合物或微生物所激活，導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬。 C3是補(bǔ)體系統(tǒng)的主要成分之一, 可以通過經(jīng)典或旁路途徑激活。在盛有0. 5 mL 致敏羊紅細(xì)胞( SRBC)的試管中, 加入0. 5 mL 魚血清(空白對照組加入0. 85% 的NaCl溶液, 全溶對照組加入