與黃瓜果皮綠色性狀相關(guān)的SRAP分子標(biāo)記.pdf

1、本研究以黃瓜WD3×B-2-2構(gòu)建了F2雜交群體，采用BSA(Bulked Segregant Analysis)法結(jié)合SRAP(Sequence-related Amplifled Polymorphism，SRAP，序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性)分子標(biāo)記技術(shù)，尋找與黃瓜果皮綠色性狀相關(guān)的分子標(biāo)記。研究結(jié)果如下： 以綠皮黃瓜“WD3”和白皮黃瓜“B-2-2”為父母本雜交得到F1代，F(xiàn)1代經(jīng)自交得到F2代，F(xiàn)2代種植123株。對(duì)F2代單株

2、上所有果實(shí)果皮進(jìn)行葉綠素含量的測(cè)定，根據(jù)果皮葉綠素含量將葉綠素含量在0.07～0.08mg·kg-1確定為綠皮株，葉綠素含量在0.005 mg·kg-1以下的確定為白皮株。得到綠色果皮植株94株，白色果皮植株29株。綠皮株和白皮株的比例接近3:1，說(shuō)明綠皮相對(duì)于白皮為完全顯性。 采用改良的CTAB(三甲基十六烷基溴化銨法)，以黃瓜幼嫩葉片為材料提取黃瓜基因組DNA,經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果表明提取的DNA條帶完整、質(zhì)量好。

3、 采用集群分離分析法(BSA)按DNA濃度將10株純綠皮株等量混合，構(gòu)建綠皮DNA池；將10株白皮株等量混合構(gòu)建白皮DNA池。用380條SRAP隨機(jī)引物對(duì)黃瓜的綠皮池和白皮池進(jìn)行擴(kuò)增，其中具有差異帶(綠皮植株有而白皮植株沒(méi)有的)的引物共有2對(duì)。用上述2對(duì)引物對(duì)F2代單株進(jìn)行驗(yàn)證，最終確定所獲得的2個(gè)多態(tài)性標(biāo)記，即ME9EM1-309和ME8EMl4-425，它們都能擴(kuò)增出與綠色性狀相關(guān)的標(biāo)記。它們對(duì)F2群體色澤驗(yàn)證的符合率分別為

4、93.4％和96％。 經(jīng)JOINMAP3.0計(jì)算，ME9EM1.309與黃瓜果皮綠色基因的遺傳距離為6cM。ME8EM14-425與黃瓜果皮綠色基因的遺傳距離為8.3cM。 將獲得的特異片段進(jìn)行回收、克隆和測(cè)序。目標(biāo)條帶與載體連接和轉(zhuǎn)化后，進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)，結(jié)果表明，此標(biāo)記轉(zhuǎn)化菌株的插入片斷和目的片斷大小一致，說(shuō)明所克隆是目的片斷。采用Blast軟件在GeneBartk數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行查詢，未發(fā)現(xiàn)與所獲得的兩個(gè)標(biāo)記片段相似