乙肝感染者血清HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、背景：乙型病毒性肝炎是影響人類健康的重要傳染病之一，疾病的早期診斷和抗病毒治療可有效地阻斷 HBV傳播和降低HBV相關(guān)的疾病負(fù)擔(dān)。HBV血清學(xué)標(biāo)志物是HBV診斷和病情評估的重要依據(jù)和指標(biāo)。在日常HBV血清學(xué)檢驗中，常會出現(xiàn)一些不典型血清學(xué)模式，難以合理解釋。目前研究認(rèn)為這些不典型的血清學(xué)表現(xiàn)可能與病毒或宿主免疫方面的改變相關(guān)。HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象是一類較常見的不典型血清學(xué)模式，目前研究認(rèn)為其發(fā)生可能與HBV S基因突變株相關(guān)，

2、但其機制仍未充分闡明。由于既往研究樣本量和研究對象異質(zhì)性的限制，對該現(xiàn)象的流行病學(xué)特征和臨床特征的認(rèn)識仍存在爭議，對HBsAg與抗-HBs共存感染者中抗-HBs水平和親和力的研究也不足，因此HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的臨床意義尚未充分闡明。另外，對HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象機制的研究均來自病例對照研究，盡管有少部分研究報道該現(xiàn)象可以持續(xù)存在，但缺乏對該現(xiàn)象自然轉(zhuǎn)歸的研究，即該現(xiàn)象的產(chǎn)生、血清學(xué)指標(biāo)和病毒基因特征的變化趨勢、相關(guān)的

3、預(yù)后轉(zhuǎn)歸均未見報道。
　　目的：通過系統(tǒng)綜述和Meta分析的方法了解和分析HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的流行病學(xué)特征和臨床特征，同時測定共存感染者血清抗-HBs的親和力常數(shù)，以明確其臨床意義。結(jié)合HBsAg陽性感染者隊列和HBsAg與抗-HBs共存感染者隊列的隨訪，探明HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的自然轉(zhuǎn)歸和相關(guān)的影響因素。基于深度測序技術(shù),結(jié)合HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的自然轉(zhuǎn)歸，分析其病毒準(zhǔn)種的變化過程，進一步闡述病毒

4、因素在HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象發(fā)生過程中的作用。
　　方法：
　　1.檢索Pubmed、Medline、Web of Science、Embase和Cochrance等外文數(shù)據(jù)庫，充。觀測結(jié)局指標(biāo)包括：感染者年齡、性別、HBV DNA水平、ALT水平和“a”決定簇突變。連續(xù)變量采用平均差和95％置信區(qū)間表示、二分類變量用相對危險度和95%置信區(qū)間表示。采用I2檢驗分析納入研究的統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性。
　　2.以HBsAg

5、與抗-HBs共存感染者為病例組，以慢性HBV感染者為對照組，進行HBsAg定量檢測，比較兩組感染者HBsAg水平的分布特征；在前期突變分析的基礎(chǔ)上進一步用Jameson-Wolf算法計算突變氨基酸序列與野生氨基酸序列的抗原性指數(shù)，分析突變位點引起的抗原性指數(shù)變化。同時以HBsAg與抗-HBs共存感染者為病例組，以疫苗接種者為對照組，進行抗-HBs定量檢測，采用競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗進行抗-HBs親和力常數(shù)測定，比較兩組人群抗-HBs水平

6、的分布特征和親和力常數(shù)的大小。
　　3.對HBsAg陽性/抗-HBs陰性感染者每年進行一次隨訪，檢測其血清學(xué)指標(biāo)，分析HBsAg與抗-HBs共存感染現(xiàn)象的發(fā)生率和影響因素。采用配對病例對照研究方法分析新發(fā)HBsAg與抗-HBs共存感染者在抗-HBs產(chǎn)生前后血清學(xué)指標(biāo)和病毒序列特征的變化情況。同時對HBsAg與抗-HBs共存感染者進行隨訪，觀察其血清學(xué)指標(biāo)和病毒序列特征的變化情況。
　　4.選取6例新發(fā)HBsAg與抗-HBs共

7、存感染者，擴增其S區(qū)基因片段，采用羅氏GS FLX+454進行深度測序，分析其準(zhǔn)種構(gòu)成，比較其在抗-HBs產(chǎn)生前后準(zhǔn)種構(gòu)成的變化情況，同時分析準(zhǔn)種構(gòu)成特征與血清指標(biāo)間的相互關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.按檢索策略共檢索到文獻6867篇，最后納入文獻23篇，HBsAg與抗-HBs共存感染者病例1709例，慢性HBV感染者對照18615例。Meta分析結(jié)果顯示，HBsAg陽性人群中，HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的流行率約為4.1

8、5%(95% CI:4.00%～5.00%)。HBsAg與抗-HBs共存感染者年齡高于對照組(MD=1.96歲,95%CI:0.07～3.86,P=0.04)；HBV DNA水平低于對照組（MD=0.30 log10 copies/ml,95%CI:0.05～0.55,P=0.02)。兩組感染者間HBeAg陽性率（OR=1.15,95%CI:0.93～1.42,P=0.21）和ALT水平(MD=-4.05 IU/L,95%CI:-15.

9、15～7.05,P=0.47)均無顯著性差異。HBsAg與抗-HBs共存感染者“a”決定簇126、129、130、131、133、134、135、138和145位點的突變率顯著高于對照組，存在統(tǒng)計學(xué)差異，而其他位點間未見統(tǒng)計學(xué)差異。
　　2.HBsAg與抗-HBs共存感染者HBsAg水平與慢性HBV感染者無統(tǒng)計學(xué)差異（2.99±0.80 vs3.19±0.74 log IU/ml, F=2.12,P=0.15）?！癮”決定簇突變均

10、引起HBsAg MHR和“a”決定簇抗原指數(shù)的顯著增加，其中MHR抗原性指數(shù)增加5.02（t=3.00，P=0.01），“a”決定簇指數(shù)增加4.21（t=2.83，P=0.02）。HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs水平顯著低于疫苗接種者（1.69±0.53 vs2.70±0.45 log IU/ml，F(xiàn)=4.18，P=0.04）。HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs親和力常數(shù)為3.94±2.9410-8mol/l，疫苗

11、接種者的抗體親和力常數(shù)為3.55±2.7710-8mol/l，兩組人群抗-HBs親和力常數(shù)間無統(tǒng)計學(xué)差異（t=0.34，P=0.74）。
　　3.HBsAg陽性/抗-HBs陰性感染者隨訪結(jié)果顯示，HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象的年均發(fā)生率為1.41±0.28%。影響抗-HBs產(chǎn)生的因素有年齡≥50歲（RR：1.02,95%CI：1.00～1.04，P=0.03），HBeAg陽性（RR：3.42,95%CI：1.90～6.17，P＜

12、0.01），基線ALT異常（RR：3.65,95%CI：1.94～6.89，P＜0.01），HBV DNA水平≥20000IU/ml（RR：2.25,95%CI：1.26～3.99，P＜0.01）。新發(fā)HBsAg與抗-HBs共存感染者在抗-HBs產(chǎn)生前后其HBsAg水平和ALT水平未見顯著性變化，但其HBV DNA水平顯著下降（t=3.26，P＜0.01）。HBsAg與抗-HBs共存感染者HBeAg陰轉(zhuǎn)率與未產(chǎn)生抗-HBs的HBeAg陽

13、性感染者（6/17 vs209/548，P=0.89）無顯著性差異。序列特征分析顯示，擴增獲得的5對新發(fā)共存感染者HBVS基因片段中，有3對感染者其基因型與序列均未發(fā)生變化，剩余2對感染者在抗-HBs產(chǎn)生后出現(xiàn)“a”決定簇突變株。對HBsAg與抗-HBs共存感染者隨訪，共有效隨訪58例共存感染者，平均隨訪2.9±1.49年，其中有15例感染者發(fā)生抗-HBs轉(zhuǎn)陰，但其中5例感染者在隨后的隨訪中，又可檢測到抗-HBs，HBsAg與抗-HBs

14、共存感染者發(fā)生抗-HBs陰轉(zhuǎn)的年均發(fā)生率為18.05%；有4例感染者HBsAg消失，年均發(fā)生率為7.69%；其余74.26%的感染者持續(xù)HBsAg與抗-HBs共存狀態(tài)。在持續(xù)共存現(xiàn)象的感染者中，觀察其血清學(xué)指標(biāo)發(fā)現(xiàn)其HBsAg水平（F=0.78，P=0.46）、抗-HBs水平（F=1.11，P=0.34）、HBV DNA水平（F=0.42，P=0.66）和ALT水平（F=0.39，P=0.68）均未見顯著性變化。序列特征分析顯示，擴增獲

15、得的14對共存感染者HBV S基因片段中，有7對感染者存在“a”決定簇突變株，突變點位I126N、P127S、Q129N、Q129H、M133L、Y134N、Y134F、G145A，1對感染者未見“a”決定簇突變株，3對感染者隨訪后發(fā)生了S區(qū)“a”決定簇突變株的變化。
　　4.在發(fā)生抗-HBs轉(zhuǎn)換的6例感染者中，4例感染者初始血清的優(yōu)勢毒株為野生株，其所占比例分別為99.01%、98.85%、99.38%和96.93%，2例感染者

16、初始血清優(yōu)勢毒株為“a”決定簇突變株，其所占比例為89.89%和51.11%。在產(chǎn)生抗-HBs后，6例感染者優(yōu)勢毒株均未發(fā)生變化。同時其氨基酸和核苷酸水平的準(zhǔn)種復(fù)雜度（P=0.39和P=0.51）、氨基酸和核苷酸水平的平均遺傳距離（P=0.68和P=0.86）、平均同義替換數(shù)（P=0.86）和平均非同義替代數(shù)(P=0.71)在抗-HBs轉(zhuǎn)換前后均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.HBsAg與抗-HBs共存感染者HBV DN

17、A水平低于慢性感染者，提示共存感染者體內(nèi)病毒復(fù)制水平較慢性感染者低。HBsAg與抗-HBs共存感染者HBV“a”決定簇部分位點突變率顯著高于慢性感染者。
　　2.HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs親和力常數(shù)與疫苗接種者無顯著性差異，提示共存感染者的抗-HBs具有保護力。“a”決定簇突變可引起HBsAg“a”決定簇抗原指數(shù)的升高。
　　3.HBsAg與抗-HBs共存現(xiàn)象是HBV自然發(fā)展過程的一類，慢性感染者可自然發(fā)展