知識(shí)點(diǎn)3 微生物的分類鑒定方法

1、一、微生物分類鑒定中的經(jīng)典方法二、微生物分類鑒定中的現(xiàn)代方法1.微生物遺傳型的鑒定 DNA堿基比例的測定 核酸分子雜交法 16SrRNA寡核苷酸編目分析2.細(xì)胞化學(xué)成分的鑒定三、數(shù)值分類法,第三節(jié) 微生物分類鑒定的方法,菌種鑒定工作的步驟：,1.獲得該微生物的純培養(yǎng)物2.測定一系列必要的鑒定指標(biāo)3.查找權(quán)威性的菌種鑒定手冊,一、經(jīng)典分類鑒定方法,(一) 形態(tài)特征：包括個(gè)體形態(tài)和群體形態(tài)(即培養(yǎng)特征)

2、 1.在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形狀、大小及排列情況，革蘭氏染色反應(yīng)，有無運(yùn)動(dòng)，鞭毛著生位置和數(shù)目，芽孢的有無及芽孢著生的部位和形狀，細(xì)胞內(nèi)含物，個(gè)體發(fā)育過程中形態(tài)變化的規(guī)律性。 2.在固體培養(yǎng)基上觀察菌落的形狀、大小、顏色、光澤、粘稠度、隆起形狀、透明度及邊比重特征，和水溶性色素、質(zhì)地、移動(dòng)性、氣味等。 3.在半固體培養(yǎng)基中觀察穿刺接種后的生長及運(yùn)動(dòng)情況。 4.在液

3、體培養(yǎng)基中觀察生長特征，液體是否混濁及混濁的程度；液面有無菌膜；管底有無沉淀以及沉淀的形狀；管中有無氣泡；培養(yǎng)液中有無顏色變化等。,,(二) 生理生化特性 1.營養(yǎng)要求：可根據(jù)微生物對(duì)營養(yǎng)的不同利用能力來區(qū)別微生物。試驗(yàn)多種營養(yǎng)能否被微生物作為碳源和能源利用，以及微生物對(duì)一定有機(jī)化合物或CO2的利用能力。對(duì)于氮源來講，看其是取自蛋白質(zhì)、蛋白胨、氨基酸或銨鹽、硝酸鹽，還是大氣中的游離氮。 2.代

4、謝產(chǎn)物：不同的微生物，因生理特性的不同而產(chǎn)生不同的代謝產(chǎn)物。因此，檢查微生物的代謝產(chǎn)物，可以用來鑒別不同的微生物。在培養(yǎng)基中檢查微生物是否形成有機(jī)酸、酒精、氣體與類似的物質(zhì)；能否與解色氨酸產(chǎn)生吲哚；是否產(chǎn)生色素或其他物質(zhì)，如抗生素等。 3.酶：產(chǎn)酶的種類何反應(yīng)特性等。 4.對(duì)藥物的敏感性,,（三）血清學(xué)反應(yīng) 有時(shí)確定微生物的種，尤其是亞種，僅依據(jù)形態(tài)、生理生化等特征很難區(qū)別

5、開。因此，常借助于血清學(xué)反應(yīng)。 在微生物分類鑒定中，應(yīng)用血清學(xué)反應(yīng)的基本原理，是用已知菌種、型或菌株制成抗血清，然后根據(jù)它們與待鑒定微生物是否發(fā)生特異性的血清學(xué)反應(yīng)，來確定未知菌種、型或菌株。 血清學(xué)反應(yīng)的方法同樣可應(yīng)用于病毒的分類，尤其是應(yīng)用于噬菌體的分類，具有良好的效果。一般噬菌體都是良好的抗原，把它注射到動(dòng)物體內(nèi)可以產(chǎn)生特異性抗體。噬菌體和抗體間的反應(yīng)和其他常見的抗原抗體反應(yīng)相似。,二、

6、現(xiàn)代分類鑒定方法,（一）微生物遺傳型的鑒定 1. DNA堿基比例的測定：（G+C）mol%，DNA分子中G和C所占的摩爾百分比。 2. 核酸分子雜交法：按照堿基的互補(bǔ)配對(duì)原理，用人工方法對(duì)兩條不同來源的單鏈核酸進(jìn)行復(fù)性，以構(gòu)建新的雜合雙鏈核酸技術(shù)。 3. 16SrRNA寡核苷酸編目分析 4. 微生物全基因組序列測定,（二）細(xì)胞化學(xué)成分的鑒定1.細(xì)胞壁的化學(xué)成分：主要是肽聚糖的基本結(jié)構(gòu)2.全細(xì)胞水解液的糖型3

7、.磷酸類脂成分的分析4.枝菌酸的分析5.醌類的分析6.氣相色譜技術(shù)的應(yīng)用,三、數(shù)值分類法,數(shù)值分類法：依據(jù)數(shù)值分析的原理，借助現(xiàn)代電子計(jì)算機(jī)技術(shù)對(duì)擬分類的微生物對(duì)象按大量表型性狀的相似程度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、歸類的方法。步驟： ①確定分類單元和選擇分類特征； ②進(jìn)行特征測定或從文獻(xiàn)中收集有關(guān)OUT（操作分類單位）的各項(xiàng)特征資料； ③根據(jù)所編制的計(jì)算機(jī)程序要求，將特征資料進(jìn)行編碼、標(biāo)準(zhǔn)化并輸入計(jì)算機(jī)； ④由計(jì)