hiv實驗室檢測

1、HIV實驗室檢測,實習生：葉貝2017/4/28,目錄,HIV病原學,HIV人類免疫缺陷病毒，由包膜及核心組成，為RNA病毒,HIV核心部分包括兩條單股RNA鏈，核心結構蛋白及復制所需酶類（蛋白酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶）,HIV病毒逆轉(zhuǎn)錄酶無校對功能，故病毒變異性強，導致檢測結果假陰性,HIV病原學,病毒識別易感細胞膜表面受體，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下由RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA,經(jīng)DNA轉(zhuǎn)錄及翻譯后形成蛋白外殼，將病毒RNA包裹其中，生成新的HIV,

2、主要侵入T淋巴細胞及神經(jīng)細胞，導致細胞免疫功能缺陷，增加機會性感染,,HIV流行病學,,,,全國呈低流行態(tài)勢，部分地區(qū)疫情嚴重,HIV主要分為兩種HIV-1和HIV-2兩型；HIV-1類為全球主要流行類型，分為M、 O、N三個亞型組,HIV傳播途徑,,1、傳染源：病人及無癥狀攜帶者血液、精子、子宮和陰道分泌物、唾液、眼淚和乳汁等傳播,2、傳播途徑性傳播：同行、異性、雙性性接觸母嬰傳播：經(jīng)胎盤、分娩及哺乳時傳播血液制品傳播：共

3、用針具靜脈注射毒品，介入性醫(yī)療操作，紋身，耳洞等,HIV感染自然史,急性期,艾滋病期,無癥狀期,初次感染HIV 2-4周，傳染性最強主要以發(fā)熱、關節(jié)痛、淋巴結腫大為特征可檢出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置,可持續(xù)6-8年，HIV在感染者體內(nèi)不斷復制，具有傳染性可檢測HIV及抗體，CD4+ T淋巴續(xù)保逐漸下降,HIV感染最終階段，HIV血漿病毒載量明顯升高，CD4+T淋巴細胞<200個/ul主要表現(xiàn)為各種機會性感

4、染及腫瘤,HIV實驗室指標,初篩試驗+確證試驗,HIV檢測流程,全國艾滋病檢測技術規(guī)范-2015年修訂版檢測流程,初篩試驗,篩查,復檢,,HIV檢測流程,全國艾滋病檢測技術規(guī)范-2015年修訂版檢測流程,確證試驗,確證,僅能檢測HIV-1，不能檢測HIV-2和HIV Ag，靈敏度有限，窗口期長，易錯過早期感染樣本 試劑成本高，操作繁瑣，結果判定主觀,,HIV檢測流程,初始反應必須使用抗原和抗體聯(lián)合檢測的第四代免疫學方法，這類方法可以

5、同時檢測HIV-1抗體、HIV-2抗體和HIV p24抗原，檢測出HIV-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始檢測無反應性則無需進行進一步檢測,初始反應陽性標本需經(jīng)過FDA批準的抗體鑒別試劑進行HIV-1和HIV-2抗體鑒別試驗，結果以HIV-1抗體陽性、HIV-2抗體陽性、HIV抗體陽性或無法鑒別來解釋,初始檢測有反應，抗體鑒別檢測無反應性或不明確標本須經(jīng)HIV-1核酸檢測，HIV-1 NAT有反應性而抗體鑒別無反應性為急性H

6、IV-1感染；HIV-1 NAT有反應性而抗體鑒別試驗不明確為HIV-1感染；HIV-1 NAT無反應性而抗體鑒別不明確為假陽性結果,聯(lián)合試驗,鑒別試驗,核酸試驗,美國CDC推薦HIV檢測流程 2014修訂版,HIV檢測,HIV感染后首先檢測到HIV RNA,第四代HIV檢測試劑檢測到HIV p24抗原，為抗原抗體聯(lián)合檢測,第三代及其以前的試劑均為只檢測HIV抗體,HIV-1/2/O抗體,HIV-1/2/O抗體+HIV p24抗原,3r

7、d 代抗體檢測,核酸檢測方法,4th 代抗原抗體檢測,周,年,從初始感染后的時間,無癥狀期,急性期,,第一個血清轉(zhuǎn)換窗口期,,核酸檢測方法,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,羅氏HIV試劑,艾滋病期,縮短檢測窗口期，早期診斷,2nd 代抗體檢測,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,羅氏HIV試劑,縮短檢測窗口期，早期診斷,E

8、lecsys HIV Combi PT陽轉(zhuǎn)時間較PCR 方法平均晚2天，早于或等于其它方法與三種第三代檢測方法相比， Elecsys Combi PT 是 1.2 days ，優(yōu)于Elecsys HIV combi (2.0 days), Zhuhai Livzon anti-HIV(6.2 days) and Serodia® HIV1/2 (7.8 days).與ADVIA Centaur相比, the Elecs

9、ys HIV combi PT’s 的檢出時間是 0 days ， ADVIA Centarur’s (1.0 days).與VIRONOSTIKA® HIV Univ-Form II plus O相比，Elecsys HIV combi PT’s 是 1.5 days ，VIRONOSTIKA® HIV Univ-Form II plus O’s (7.5 days).,羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體

10、聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,縮短檢測窗口期，早期診斷,,5.478 days(Roche, data on file),羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,gp120,gp41/gp36,p17（基質(zhì)蛋白）,RT(逆轉(zhuǎn)錄酶),RNA,P24 抗原是HIV病毒的核心蛋白,HIV-Ag的檢測,HIV-Ab的檢測,,膜蛋白,,,

11、羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,可識別所有亞型,羅氏HIV試劑,可識別所有亞型,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,619,8,472,羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,9 min,9 min,9 min,預處理,裂解出p24抗原

12、,Ag-Ab復合物,磁珠加入,共27min孵育,測量池檢測,夾心法形成免疫復合物,羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,早期感染血清轉(zhuǎn)換期的檢測,不同時期HIV感染病人的檢測,,高靈敏度,不同亞型的檢測,羅氏HIV試劑,第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測法 Elecsys ® HIV combi PT,高特異性,羅氏HIV試劑,排除類風濕因子、自身抗體、單

13、克隆丙種球蛋白、EB病毒抗體、巨細胞病毒抗體、單純皰疹病毒抗體、流感疫苗等非特異性干擾、抗干擾能力強,,,高特異性,Case分享,羅氏HIV Combi 試劑2次均出現(xiàn)陽性結果，P24抗原也均出現(xiàn)條帶，但HIV-RNA分析病毒為陰性，最終報告為陰性，該患者實為淋巴瘤，分析時注意干擾因素淋巴瘤患者、孕婦、腫瘤病人、透析患者4種病人都可能出現(xiàn)HIV初篩陽性，需特別對待,華西案例分析 CASE 1,Case分享,華西案例分析 CASE