天然藥物化學實驗須知實驗要求二實驗室規(guī)則三

1、天然藥物化學實驗須知（一）實驗要求 （二）實驗室規(guī)則（三）實驗室安全注意事項 （四）實驗報告格式,實驗一 藥用植物化學成分的提取一 實驗目的 1 了解天然藥物成分的分析方法2 掌握預實驗的實驗技術二 實驗原理：1 單項預試法：尋找特定成分。2 系統預試法：在未知情況下對可能含有的各類成分進行全面檢查。,三 實驗步驟：1 制備樣品試液 （1）石油醚提取液 —— 揮發(fā)油、油脂、甾醇三萜（2）

2、乙醇提取液 —— 黃酮內酯、生物堿、酚類香 醇、萜類內酯、強心苷、鞣質、有機酸（3）水提取液 —— 氨基酸、多肽、蛋白質、糖類、皂苷有機酸2 選擇合適的展開系統3 薄層層析 取長春花粉末20g,加70%乙醇150ml加熱回流0.5h,抽濾，濾液減壓濃縮至浸膏。 展開系統： 氯仿：甲醇=10：1,實驗 二 薄層層析及中藥成分預實驗一 實驗目的：1 了解薄層層析的原理及應用。2 掌握薄層層析的實驗技術。

3、 二 實驗原理薄層色譜即TLC，屬固液吸附色譜，利用吸附劑（硅膠）對不同組分吸附能力的差異，從而達到分離目的的方法。三 TLC的應用1 可用于判斷兩個化合物是否相同。2 可用于確定混合物中含有的組分數。3 可用于為柱色譜選擇合適的展開劑。4 可跟蹤有機反應。,實驗步驟1 點樣：畫出起點線，即距離薄層板一端約1cm處。2 展開：浸入深度0.5cm,待展開劑前沿離頂端1cm處，取出用鉛筆畫出展開劑前沿

4、。 展開劑：氯仿：石油醚=5：1 顯色：（1） 紫外燈；（2）碘缸；（3）5% 硫酸乙醇溶液4 計算比移值 Rf = 原點距斑點中心距離/原點距展開劑前沿距離思考題：1、在混合物的薄層色譜中，如何判定各組分在薄層上的位置？2、展開劑的的高度若超過了點樣線對實驗結果有何影響？3、對一個未知混合物如何選擇展開劑？,實驗三 硅膠柱層析一 實驗目的 1、 了解硅膠柱層析的原理。

5、 2 、掌握硅膠柱層析的技術。二 實驗原理 硅膠柱層析屬吸附色譜，是利用吸附劑硅膠對被分離物質的吸附能力不同，用溶劑洗脫，以使組分分離。,三 實驗步驟1 裝柱 濕法：量取一定量體積的洗脫劑（V0），倒入色譜柱中，然后，將硅膠放置于燒杯中，加入一定量的洗脫劑攪拌至無氣泡，加入柱內，并將活塞打開，一邊沉降一邊加，直到加完硅膠，仍使洗脫劑流滴一段時間，使色譜柱中高于硅膠的溶劑幾乎全部留入接收瓶中，正確計量接收器中

6、的溶劑量（V1），計算色譜柱的保留體積（V0-V1）2 上樣 干法： 稱取一定量硅膠（色譜柱中硅膠量的10%），置于蒸發(fā)皿中，用滴管慢慢加入樣品溶液，用滴管慢慢加入樣品溶液，邊加邊攪拌，待硅膠已完全被樣品溶液濕潤時，在水浴鍋上蒸除溶劑，蒸除溶劑后的吸附有樣品的硅膠在1000C加熱除去水分，,3 洗脫 樣品加完后打開活塞放出液體至柱面相同時，加入洗脫劑至液面高出柱面約10cm,在柱面上加入一個小濾紙片，再加

7、2cm厚的硅膠，再加一團脫脂棉。 洗脫劑：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脫收集：每份洗脫液按30ml收集 顯色合并：,槐花米中蘆丁的提取分離,實驗目的,通過蘆丁的提取與精制，掌握堿溶酸沉法提取黃酮類化合物的原理與操作。了解苷類結構研究的一般程序和方法了解UV在黃酮類化合物結構鑒定中的應用,實驗原理,蘆丁溶于熱水，難溶于冷水，且分子具較多酚羥基，顯弱酸性，在堿液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采用堿提酸沉法提取蘆

8、丁。,實驗方法,1、蘆丁的提取、精制,槐米粗粉（40g）,,置1000ml燒杯中，加水600ml，攪拌下加入石灰乳，調pH8—9，加熱至微沸，保持30分鐘，趁熱抽濾。,,,,殘渣,濾液,,,,,在60—70℃下用濃鹽酸調pH4—5，靜置1小時，抽濾,沉淀（粗品蘆丁）,濾液,粗品蘆丁,,將沉淀懸浮于蒸餾水中，加熱煮沸15min，趁熱 抽濾,,,,殘渣,濾液,,在60—70℃下用濃鹽酸調pH4—5，靜置1小時，抽濾,蘆丁精品,注：①加

9、石灰乳時pH不能過高，否則鈣能與蘆丁形成螯合物而不溶于水而析出；②加熱過程中須不斷補充蒸發(fā)掉的水分，以保持pH8—9；③pH過低會使蘆丁形成鹽而降低產率；④可利用蘆丁在冷熱水中溶解度差別來達到結晶目的。得到的沉淀要粗稱一下， 按蘆丁在熱水中1：200溶解度加蒸餾水進行重結晶。,2、蘆丁的鑒定,（1）蘆丁的定性反應： 取蘆丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述試驗。 ① 取上

10、述溶液1~2ml，加2滴濃鹽酸，再酌加少許鎂粉注意觀察 顏色變化情況。 ② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并詳細記錄 顏色變化情況。 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等體積的10%α—萘酚乙醇溶液，搖勻， 沿著管壁滴加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色變化,思考題,苷類結構的鑒定大體程序如何？怎樣確定蘆丁結構中糖基是否聯結在槲皮

11、素3-O-上？怎樣證明蘆丁分子中只含有一個葡萄糖及一個鼠李糖？,大黃中蒽醌類成分的提取分離,實驗目的,1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技術；2．掌握蒽醌類化合物鑒定方法；3.了解液液萃取法分離混合物的實驗方法；,實驗原理,利用乙醇為提取溶劑，可把不同類型性質互異的蒽醌類成分提取出來；總蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得總提取物可用乙醚提取總苷元；根據蒽醌衍生物的酸性強弱，用不同的堿液進行萃取，最后得到不同的蒽醌苷

12、元。,實驗方法,1、大黃中總蒽醌成分的提取分離,大黃粗粉100g,,置1000ml 圓底燒瓶中，加入95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁熱抽濾,,,,醇液,藥渣,,加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr，趁熱抽濾,,,,醇液,藥渣,,,,,,,乙醇提取液,,靜置冷卻，抽濾,濾液,,減壓回收乙醇至糖漿狀，將濃縮物轉移至250ml三角瓶中,乙醇總提物,,放冷，加入乙醚60ml冷浸，振搖20′將乙醚液傾入500ml三角瓶中,,,,乙

13、醚層,浸膏,,,,,40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）,乙醚層,浸膏,,,,,乙醚總提液,2、游離蒽醌的分離,乙醚總提液,5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水層顏色變淺,,,,,乙醚層,堿水層,5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml,,,,,堿水層,乙醚層,2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml，,,,,,乙醚層,堿水層,滴加HCl酸化，靜置沉淀，抽濾，水洗至中性，干燥,,沉淀

14、I，大黃酸,酸化，抽濾水洗，干燥,,沉淀Ⅱ大黃素,酸化，抽濾水洗，干燥,,,沉淀Ⅲ大黃素甲醚、大黃酚,3、蒽醌類化合物的檢識,（1）薄層鑒別 吸附劑：硅膠 展開劑：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水 （25：75：5：35：6：25） 顯 色：紫外燈下觀察，斑點為黃色,（2）呈色反應 ① 滴加2%NaOH水溶