血液標本的臨床檢驗

1、血液及骨髓標本的細菌學檢驗,一、標本的采集,1．采血指征： 發(fā)熱(≥38℃)或低溫(≥36℃)寒戰(zhàn)，白細胞增多，皮膚黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血壓降低，C反應蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出現(xiàn)粒細胞減少，血小板減少等，或同時具備上述幾種體征時而臨床可疑菌血癥應采集血液培養(yǎng),。,,2．采血時機：在患者發(fā)熱期間越早越好，最好在抗菌治療前，以發(fā)熱初期或高峰時為宜。,,3．采血次數(shù)及間隔：對懷疑菌血癥的成年病人，推薦同時在不同部位采集

2、2-3套（包括一套需氧瓶、一套厭氧瓶或2套需氧瓶）但24小時內(nèi)一般不超過3次。以后2～5天不必采血。但心內(nèi)膜炎、真菌血癥和導管相關(guān)性敗血癥應多次采集。嬰幼兒病人，推薦在不同部位采集2套，可不做厭氧培養(yǎng)。,4．采血量　以培養(yǎng)基的1/10為宜。成人每穿刺點應采血5～10ml。兒童采血量適當減少，嬰兒抽血量1～2ml。5．采血方法： a. 皮膚消毒和無菌操作； b. 從肘靜脈采血；對于亞急性心內(nèi)膜炎等病人，應從肘動脈或股動脈

3、采血更適宜； c. 不推薦血入瓶前換針頭；,,6。骨髓標本：用骨髓穿刺針從髂骨采集7.腦脊液標本 1. 嚴格無菌操作，采集后置于無菌試管中，15 min內(nèi)保溫送到實驗室，絕不可冷藏。 2. 腦脊液標本留取最小量：細菌：≧1ml（但抗酸桿菌≧2ml），真菌：≧2ml,8.標本拒收標準： 血培養(yǎng)瓶破裂或有明顯污染 培養(yǎng)瓶標識與化驗申請單不符 用過期的培養(yǎng)瓶采集標本、采血量不足 對于不合格標本，及時通

4、知采集人員重新留取標本,二、標本的接種,1、血液標本采集后，立即注入適當?shù)囊后w增菌培養(yǎng)基內(nèi)，迅速輕搖，使充分混合，以防止凝固。2、一般細菌用普通肉湯或酚紅葡萄糖肉湯，營養(yǎng)要求較高的細菌用肝浸液或胰胨肉湯等。3、如果病人曾服用磺胺類藥物，應在每100 ml 培養(yǎng)基內(nèi)加對氨苯甲酸5 mg 。如果病人已用青霉素治療，應在培養(yǎng)基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐熱，應在臨用時加入）。若病人已用其他抗生素治療時，可用硫酸鎂肉

5、湯增菌。4、接種時應嚴格注意無菌操作，避免污染雜菌,三、細菌的培養(yǎng),1、標本的自動化培養(yǎng) 血培養(yǎng)瓶置于全自動血培養(yǎng)儀中，陽性儀器報警 。涂片革蘭染色，鏡檢，結(jié)果想臨床醫(yī)師報告。同時轉(zhuǎn)鐘血平板、麥康凱或加做巧克力平板，并進行直接藥敏試驗。挑取菌落涂片鏡檢，分別選用GPI或GNI上機進行細菌鑒定和藥敏試驗。,2、標本的手工培養(yǎng) 標本置35 ±1 ℃溫箱內(nèi)孵育，每天取出一次觀察有無細菌生長，（注意觀察肉湯內(nèi)有無混濁、沉

6、淀、菌膜、色素、血液變色、指示劑變色等現(xiàn)象）。疑有細菌生長時，挑取培養(yǎng)物涂片行革蘭染色鏡檢。及時轉(zhuǎn)種血平板或其他培養(yǎng)基進行藥敏試驗或分離培養(yǎng)。根據(jù)菌落特征及菌體染色鏡檢形態(tài)，可得出初步印象，并需繼續(xù)培養(yǎng)，按各種屬細菌加以鑒定。報告：“有X X X 菌生長,如不見細菌生長，應繼續(xù)培養(yǎng)至第7 天，取出后接種于血平板，經(jīng)培養(yǎng)仍無細菌生長時，可報告為：“經(jīng)7 天培養(yǎng)無細菌生長?！?對于亞急性心內(nèi)膜炎病人標本，應培養(yǎng)一個月，才能作出結(jié)論。3.

7、特殊菌的培養(yǎng) 布魯菌的培養(yǎng)：將血液標本接種于肝浸液2 支，分別置于10％二氧化碳及普通環(huán)境中35±1 ℃培養(yǎng)，每2天觀察一次，若有菌生長，作涂片染色鏡檢，并移種于2 份肝浸液平板或血平板，分別置于10％二氧化碳及普通環(huán)境下培養(yǎng)。用菌落再作布氏桿菌血清凝集試驗，如為陽性，可報告為：“培養(yǎng)出布氏桿菌”。必要時，進一步鑒定及分型。若培養(yǎng)30天后仍無細菌生長者，則可報告：“經(jīng)X 周培養(yǎng)無細菌生長?！?四、檢驗程序,五、結(jié)果報告

8、,1、陽性結(jié)果報告分為三級。一級報告：陽性報警，涂片鏡檢結(jié)果（電話）通知臨床，同時記錄報告日期、時間、內(nèi)容及接受報告人的姓名。血培養(yǎng)陽性應列為危急。二級報告：報告直接藥敏結(jié)果。根據(jù)涂片染色選擇MH 或加血MH平板，取培養(yǎng)液0.2ml涂布平板，根據(jù)鏡下特征選擇藥敏紙片，6～7個小時讀取初步藥敏結(jié)果。三級報告：報告細菌種屬、藥敏試驗、結(jié)果評價和建議。如與初步報告不符，及時與臨床溝通，并在書面最終報告注明變更內(nèi)容,2、陰性結(jié)果的報告

9、血培養(yǎng)72小時，未見細菌生長，應通知臨床醫(yī)生，以便作相應處理，但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培養(yǎng)至第5日，方可發(fā)出陰性報告。如發(fā)現(xiàn)有菌生長，可補發(fā)報告。對發(fā)出報告進行銷號，并做好菌名或無菌及報告日期登記3、結(jié)果上報 傳染?。▊抽T菌）報醫(yī)務科 傳染病菌種保存，交疾病控制中心復核,六、注意事項,1.抽血后無需更換針頭即可注入血液瓶中2.抽血前應貼好標簽，標簽不能覆蓋條形碼3.若不能立即送實驗室，應置室溫或35培養(yǎng)箱，絕不可放冰箱4.有自動

10、鑒定儀的實驗室應24小時值班，以便及時處理陽性報警標本。5.如不同部位采集的標本結(jié)果不一致，或均陽性為凝固酶陰性葡萄球菌，應與臨床溝通。,七、臨床意義,引起敗血癥的多為耐藥性金黃色葡萄球菌、某些革蘭陰性桿菌及部分球菌。癤、癰、膿腫和化膿性骨髓炎繼發(fā)的敗血癥主要由金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌引起；尿道、膽道、胃腸道和粘膜損傷引起的敗血癥以大腸埃希菌最常見；燒傷后銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌多見；傷寒和服傷寒于發(fā)病1-2周作血液培