螺傳寄生蟲(chóng)病及螺類感染檢測(cè)

1、螺傳寄生蟲(chóng)病及螺類感染檢測(cè),寄生蟲(chóng)病研究所 陸紹紅,,ZHEJIANG ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES,創(chuàng)新 服務(wù),螺傳寄生蟲(chóng)病血吸蟲(chóng)病廣州管圓線蟲(chóng)病華支睪吸蟲(chóng)病并殖吸蟲(chóng)病布氏姜片蟲(chóng)病… …,螺類感染檢測(cè)病原學(xué)檢測(cè)：分子檢測(cè)： PCR LAMP,一、螺傳寄生蟲(chóng)病,一、螺傳寄生蟲(chóng)病,吸蟲(chóng)主要特點(diǎn),蟲(chóng)卵必須入水才能發(fā)育；生活史復(fù)雜，第一中間宿主多為淡

2、水螺。成蟲(chóng)背腹扁平，具口、腹吸盤(pán)，寄生于人及哺乳動(dòng)物體內(nèi)。囊蚴為感染期，經(jīng)口感染。吸蟲(chóng)基本發(fā)育過(guò)程： 卵→多種幼蟲(chóng)（毛蚴→胞蚴≡﹥雷蚴≡﹥尾蚴→囊蚴）→成蟲(chóng)。,毛蚴 胞蚴 雷蚴 尾蚴 囊蚴,日本血吸蟲(chóng) Schistosoma japonicum,流行現(xiàn)狀：全球有76個(gè)國(guó)

3、家和地區(qū)有血吸蟲(chóng)的流行，在我國(guó)主要分布在長(zhǎng)江流域及以南12個(gè)省/自治區(qū)/直轄市，湖沼地區(qū)是我國(guó)目前最主要的血吸蟲(chóng)病流行區(qū)。 2008年底,衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部等聯(lián)合組織的全國(guó)血吸蟲(chóng)病疫情現(xiàn)狀考評(píng)結(jié)果顯示,全國(guó)454個(gè)血吸蟲(chóng)病流行縣(市、區(qū))人畜血吸蟲(chóng)感染率均已降至5%以下,全部達(dá)到疫情控制標(biāo)準(zhǔn)。2010年全年急感報(bào)告病例數(shù)在50萬(wàn)例以下，目前病人總數(shù)已降至40萬(wàn)以下。防治策略：以傳染源控制為主的綜合防治流行因素：傳染源：病人、病牛等

4、。傳播環(huán)節(jié)：含蟲(chóng)卵的糞便污染水源；水體中的釘螺；接觸含尾蚴的疫水。治療藥物：吡喹酮、青蒿素、蒿甲醚,六種寄生于人體的血吸蟲(chóng),日本血吸蟲(chóng)（S．japonicum）曼氏血吸蟲(chóng)（S．mansoni）埃及血吸蟲(chóng)（S．haematobium）間插血吸蟲(chóng)（S．intercalatum）湄公血吸蟲(chóng)（S．mekongi）馬來(lái)血吸蟲(chóng)（S．malayensis）,日本血吸蟲(chóng) 曼氏血吸蟲(chóng) 埃及血吸蟲(chóng) 間插血吸蟲(chóng) 湄公血吸蟲(chóng),日本血吸蟲(chóng)生活

5、史,血吸蟲(chóng)中間宿主—釘螺,山丘型釘螺 水網(wǎng)型釘螺 湖沼型釘螺 擬釘螺 細(xì)鉆螺 方格短溝卷 煙管螺,華支睪吸蟲(chóng) Clonorchis sinensis,病原：成蟲(chóng)寄生在人體的肝膽管內(nèi)，又稱肝吸蟲(chóng)。病變：主要表現(xiàn)為肝受損，膽管呈腺瘤樣病變，出現(xiàn)膽管炎、膽囊炎或阻塞性黃疸。嚴(yán)重時(shí)在門脈區(qū)出現(xiàn)纖維組織增生和肝細(xì)胞的萎縮變性，繼發(fā)肝硬化。分布：主要分布在亞洲，我國(guó)有25個(gè)省、市、自治區(qū)有不同程度流行。其中，廣

6、東省感染率相對(duì)較高。感染方式：食入生的或半生熟的含活囊蚴的淡水魚(yú)、蝦而感染；不良衛(wèi)生習(xí)慣，如抓魚(yú)后不洗手或用口叼魚(yú)；盛過(guò)生魚(yú)的器皿盛熟食物品等。治療：吡喹酮、阿苯達(dá)唑,華支睪吸蟲(chóng)生活史,華支睪吸蟲(chóng)第一中間宿主,并殖吸蟲(chóng) Paragonimus,病原：世界報(bào)道有50多種，中國(guó)有32個(gè)種2個(gè)型，以衛(wèi)氏并殖吸 蟲(chóng)為代表的人獸共患型和以斯氏貍殖吸蟲(chóng)為代表的獸主人次型。 分布：世界性分布，在我國(guó)27個(gè)省、市、自治區(qū)均有報(bào)道。

7、 感染方式：以各種方式食入生或半生的含活囊蚴的溪蟹或蝲蛄等。 臨床表現(xiàn): 1、亞臨床型（隱性感染） 2、急性并殖吸蟲(chóng)病，常表現(xiàn)為全身過(guò)敏反應(yīng)、高熱、胸腹痛、氣促、肝大并伴有蕁麻疹等。 3、胸肺型并殖吸蟲(chóng)病 最典型臨床表現(xiàn)：咳嗽、胸痛、咯血、痰帶腥味,并殖吸蟲(chóng)致病,肺部蟲(chóng)囊切片,肺吸蟲(chóng)病人常誤診為肺腫瘤,并殖吸蟲(chóng)生活史,并殖吸蟲(chóng)中間宿主,放逸短溝蜷,方格短溝蜷,川蜷螺,布氏姜片吸蟲(chóng)生活史,布氏姜片吸蟲(chóng)中間宿主——扁卷螺,廣

8、州管圓線蟲(chóng) Angiostrongylus cantonesis,Female adult,Male adult,流行：主要流行于東南亞、太平洋島嶼、日本和美國(guó)等30多個(gè)國(guó)家和地區(qū)；我國(guó)的自然疫源地主要分布在浙江、福建、江西、湖南、廣東、廣西、海南和臺(tái)灣地區(qū)，多數(shù)呈散在分布。 目前全世界已有3000多病例報(bào)道，2006年在北京市發(fā)生的廣州管圓線蟲(chóng)病暴發(fā)中，從6月24日發(fā)現(xiàn)首例病人至9月24日，北京市各醫(yī)院共確診

9、160例病人，其中138系因食涼拌福壽螺肉所致，此次本病暴發(fā)成為北京市的重大突發(fā)公共衛(wèi)生事件。我國(guó)已有9個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)/直轄市）報(bào)告了廣州管圓線蟲(chóng)病例，2008年底共計(jì)報(bào)告380多例，其中90%發(fā)生于群體感染。中間宿主：56余種，在我國(guó)發(fā)現(xiàn)的要有褐云瑪瑙螺、福壽螺和銅銹環(huán)棱螺。 2006~2007年全國(guó)廣州管圓線蟲(chóng)病自然疫源地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，福壽螺、褐云瑪瑙螺和蛞蝓的平均感染率分別為6.8%、13.4%和6.5%。傳染源：最主要的是鼠類，以

10、褐家鼠和黑家鼠較為普遍。經(jīng)口感染：1）生食或半生生食螺類、魚(yú)、蝦、蟹等：爆炒或麻辣福壽螺、涼拌螺肉等為主要原因；2）幼蟲(chóng)污染手或食物：用螺類喂養(yǎng)家禽或加工螺類的人員；3）生食蔬菜：陸地蝸?；蝌因跖肋^(guò)蔬菜時(shí)含幼蟲(chóng)的分泌物可能粘在蔬菜上；4）飲生水：含幼蟲(chóng)的中間宿主分泌物也可排入水中。,廣州管圓線蟲(chóng) Angiostrongylus cantonesis,廣州管圓線蟲(chóng)生活史,廣州管圓線蟲(chóng)第一中間宿主,福壽螺,褐云瑪瑙螺,銅銹環(huán)棱螺

11、,螺內(nèi)寄生蟲(chóng)的病原學(xué)檢測(cè),壓片法：逸蚴法：將單只釘螺置于指形試管內(nèi)，加脫氯水至試管口，用尼龍紗蓋好管口。置20～25℃、光照條件下，4～8 h后用放大鏡或解剖鏡在燈光下觀察指管水面有無(wú)血吸蟲(chóng)尾蚴，必要時(shí)可用白金耳取表面水滴于載玻片，在鏡下觀察。 病理切片法：消化法：將螺體軟組織剪碎，按1g組織加25ml消化液（7g 胃蛋白酶，7ml HCl，1L ddH2O）的比例置于37 ℃孵育1h，適當(dāng)孔徑的分子篩過(guò)濾后鏡檢。組織勻漿鏡檢法

12、：螺肺囊鏡檢法：將福壽螺壓碎剔殼，沿外套膜的左側(cè)至后側(cè)的基部剪開(kāi)，將外套膜向右翻開(kāi)取外套膜的后半部分的約為24 mm × l6 mm大小的橢圓形囊狀結(jié)構(gòu)“肺囊”。然后剪開(kāi)囊袋(雙層)兩邊沿，翻開(kāi)囊袋呈單層后鋪平．光鏡觀察幼蟲(chóng)結(jié)節(jié)（0.07mm*0.13mm~0.24mm*0.34mm大小，圓形或橢圓形的白色結(jié)節(jié)）。若囊袋層壁較厚，盡量拉平，或用解剖針撥動(dòng)等手段觀察囊壁組織的幼蟲(chóng)結(jié)節(jié)。,福壽螺肺囊鏡檢法,幼蟲(chóng)結(jié)節(jié),,,螺內(nèi)寄生

13、蟲(chóng)的分子檢測(cè),傳統(tǒng)的螺內(nèi)病原學(xué)檢測(cè)操作繁雜；檢測(cè)結(jié)果存在一定的假陰性和假陽(yáng)性；對(duì)一些輕度感染病原學(xué)診斷常會(huì)出現(xiàn)檢出率較低或者漏檢的情況。 PCR、LAMP等分子生物學(xué)方法的檢測(cè)操作簡(jiǎn)便、快速；檢測(cè)靈敏度高、耗時(shí)短；適合于現(xiàn)場(chǎng)螺類病原體的檢測(cè) 。,1. Kumagai T, Furushima-Shimogawara R, Ohmae H, Wang TP, Lu S, Chen R, Wen L, Ohta N: De

14、tection of early and single infections of Schistosoma japonicum in the intermediate host snail, Oncomelania hupensis, by PCR and loop-mediated isothermal amplification assay. Am J Trop Med Hyg 2010, 83:542-548.2. Chen

15、 JH, Wen LY, Zhang XZ, Zhang JF, Yu LL, Hong LD: [Development of a PCR assay for detecting Schistosoma japonicum-infected Oncomelania hupensis]. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi 2006, 24:204-207.

16、3. Vidigal TH, Magalhaes KG, Kissinger JC, Caldeira RL, Simpson AJ, Carvalho OS: A Multiplex-PCR approach to identification of the Brazilian intermediate hosts of Schistosoma mansoni. Mem Inst Oswaldo Cruz 2002, 97 Su

17、ppl 1:95-97.4. Wei FR, Liu HX, Lv S, Hu L, Zhang Y: [Multiplex PCR assay for the detection of Angiostrongylus cantonensis larvae in Pomacea canaliculata]. Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Bing Za Zhi 201

18、0, 28:355-358.5. 魏紀(jì)玲, 周衛(wèi)川, 邵碧英, 余書(shū)生, 王壽昆, 陳文炳, 陳壽鈴: PCR檢測(cè)螺類感染廣州管圓線蟲(chóng)方法的建立與應(yīng)用. 中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào) 2008, 24:1136-1140.,螺內(nèi)廣州管圓線蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)的PCR檢測(cè),野外采集小管福壽螺172只，肺檢法檢測(cè)后，進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增。多重PCR的敏感性為93.8%(45／48)，特異性為80.6％(100／124)。多重PCR法的陽(yáng)性檢出率為40.

19、1％(69／172)；肺檢法的陽(yáng)性檢出率為27.9％(48／172)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 。,小管福壽螺中廣州管圓線蟲(chóng)III期幼蟲(chóng)的PCR檢測(cè),Loop-Mediated Isothermal Amplification （LAMP）method,Target gene (DNA or RNA)Primers （FIP, F3, BIP, B3）DNA Polymerase with strand displacement ac

20、tivitydNTPsBuffer solutionRTase (for RNA),,65℃, 15 – 60 min.,Detection,SimpleRapid (high efficiency)Specific (high specificity)Cost effective,,August, 2011,Papers about LAMP in the world,August, 2011,,,,,LAMP deve

21、loped in parasites study,螺內(nèi)廣州管圓線蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)的LAMP檢測(cè),1.Kumagai T, Furushima-Shimogawara R, Ohmae H, Wang TP, Lu S, Chen R, Wen L, Ohta N: Detection of early and single infections of Schistosoma japonicum in the intermediate hos

22、t snail, Oncomelania hupensis, by PCR and loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay. Am J Trop Med Hyg 2010, 83:542-548.2.Chen R, Tong Q, Zhang Y, Lou D, Kong Q, Lv S, Zhuo M, Wen L, Lu S: Loop-mediated isoth

23、ermal amplification: rapid detection of Angiostrongylus cantonensis infection in Pomacea canaliculata. Parasit Vectors 2011, 4:204. 3. Liu CY, Song HQ, Zhang RL, Chen MX, Xu MJ, Ai L, Chen XG, Zhan XM, Li

24、ang SH, Yuan ZG, et al: Specific detection of Angiostrongylus cantonensis in the snail Achatina fulica using a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay. Mol Cell Probes 2011, 25:164-167.,Design of primers for

25、the LAMP method,,Target DNA: Sj28S rDNA Primers: FIP、 BIP、 F3、 B3,Protocal of the LAMP method,Detection,Result of Sensitivity and Specificity,LAMP和PCR群體檢測(cè)結(jié)果的比較,,,,,,,,,LAMP檢測(cè)試劑盒開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景,優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)易快速、靈敏特異；結(jié)果可視；體系穩(wěn)定；專利保護(hù)。,,推