實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色

1、實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色遼寧師范大學(xué)生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心謝鯤鵬（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、學(xué)習(xí)微生物涂片的基本技術(shù)2、鞏固顯微鏡的使用方法和無(wú)菌操作技術(shù)3、掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法和革蘭氏染色法。（二）實(shí)驗(yàn)原理：1、簡(jiǎn)單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的方法。此法操作簡(jiǎn)便，適用菌體一般形態(tài)和細(xì)菌排列的觀察。2、革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram氏創(chuàng)立的。而后一些學(xué)者在此基礎(chǔ)上作了某些改進(jìn)。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中最重要的鑒別

2、染色法。（三）實(shí)驗(yàn)器材1、菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌。2、染色劑：呂氏美藍(lán)、結(jié)晶紫、碘液、95%酒精、番紅。3、儀器或其他用具：顯微鏡、酒精燈、載玻片、接種杯、雙層瓶、擦鏡紙、吸水紙、廢液缸、洗瓶等。（四）實(shí)驗(yàn)方法：1、簡(jiǎn)單染色：（1）涂片：取兩塊載玻片，各滴一小滴生理鹽水于玻片中央，用接種環(huán)以無(wú)菌操作分別從大腸桿菌和金黃色葡萄球菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混勻并涂成薄膜。（2）干燥：室溫自然干燥。（3）固定：涂面朝上，通過(guò)火焰2

3、3次。（4）染色：將玻片平放于玻片擱架上，滴加染液于涂片上。（5）水洗：倒去染液，用自來(lái)水沖洗，直至涂片上流下的水無(wú)色為止。（6）干燥：自然干燥，或用電吹風(fēng)吹干，也可以用吸水紙吸干。（7）鏡檢：涂片干后鏡檢。2、革蘭氏染色：（1）制片：取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片，干燥，固定。（2）初染：滴加結(jié)晶紫染色1min，水洗。（3）媒染：用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min，水洗。（4）脫色：用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流

4、加95%的乙醇脫色，直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí)，立即水洗。（5）復(fù)染：用番紅復(fù)染約2min，水洗。（6）鏡檢：干燥后用油鏡觀察。（7）混合涂片染色（五）實(shí)驗(yàn)總結(jié)1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果簡(jiǎn)單染色革蘭氏染色2、復(fù)習(xí)（1）簡(jiǎn)單染色操作步驟涂片—干燥—固定—呂氏美藍(lán)染色12分鐘—水洗—干燥—鏡檢（2）革蘭氏染色操作步驟制片—初染（結(jié)晶紫）1min—水洗—媒染（碘液）1min—水洗—脫色（95%乙醇至無(wú)色）2030S—水洗—復(fù)染（番紅）2min—水洗—干燥—鏡檢

5、3、注意事項(xiàng)（1）涂片不宜過(guò)厚，以免脫色不完全，造成假陽(yáng)性。（2）乙醇脫色時(shí)間，如脫色過(guò)度，革蘭氏陽(yáng)性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時(shí)間過(guò)短，革蘭氏陰性菌也會(huì)被染成革蘭氏陽(yáng)性菌。（3）菌齡，應(yīng)選擇活躍生長(zhǎng)期的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或死亡及部分自溶，改變了細(xì)菌CW的通透性，造成陽(yáng)性菌的假陰性反應(yīng)。（4）火焰固定不宜過(guò)熱。（5）媒染劑的作用，是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或吸附力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使之不易脫落