實驗染色體組型分析

1、染色體核型分析,,實驗?zāi)康模?1．觀察人類中期染色體結(jié)構(gòu)與數(shù)目。 2．了解并掌握常規(guī)染色體的分類、分組標準。 3．掌握非顯帶染色體的核型分析方法。,意義：可確定物種的特征，確定種屬親緣關(guān)系臨床應(yīng)用（染色體疾病、產(chǎn)前診斷）,實驗原理,定義：染色體核型是指將動物、植物、真菌等的某一個體或某一分類群（亞種、種、屬等）的體細胞內(nèi)的整套染色體，按它們相對恒定的特征排列起來的圖像。,細胞（外周血等）,,體外培養(yǎng)(加PHA）,,秋水仙素處理,

2、,低滲,,,固定,制片并染色,,,顯帶染色體及其他技術(shù),非顯帶染色體技術(shù),染色體標本制作,染色體超螺旋,染色體的大小,中期染色體的典型形態(tài)結(jié)構(gòu)：,1/2,5/8,7/8,8/8,,,,近端,中央,亞中,染色體的類型：按著絲粒在染色體長軸的位置，分成： 中央著絲粒染色體：1/2～5/8亞中著絲粒染色體：5/8～7/8近端著絲粒染色體：7/8至末端(8/8),,,,,,,,生命科學中的“釣魚” （FISH）技術(shù),遺傳及

3、分子生物學實驗新技術(shù)新方法系列講座,發(fā)展歷史,熒光原位雜交技術(shù)(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)問世于70年代后期,其曾多用于染色 體異常的研究,近年來隨著FISH所應(yīng)用的探針種類的不斷增多,特別是全COSMID探針及染色體原位抑制雜交技 術(shù)的出現(xiàn),使FISH技術(shù)不僅在細胞遺傳學方面,而且還廣泛應(yīng)用于腫瘤學研究,如診斷、基因定位等,FISH的基本原理,很簡單, 就是標記了熒光的單鏈DNA(

4、探針)和與其互補的DNA(玻片上的標本)退火雜交, 通過觀察熒光信號在染色體上的位置來反映相應(yīng)基因的情況.,熒光原位雜交（FISH）,FISH技術(shù)是常規(guī)染色體分析的輔助手段。它是用熒光素標記特異探針，與染色體做雜交后，根據(jù)特異的熒光信號來判斷結(jié)果。它可用于標記染色體的識別、特異融合基因的檢測、新基因定位，用全染色體涂抹探針識別復雜的染色體結(jié)構(gòu)異常。,FISH具有其不可比擬的優(yōu)點：,1.操作簡便，探針標記后穩(wěn)定，一次標記后可使用二年。

5、2.方法敏感，能迅速得到結(jié)果。3.在同一標本上，可同時幾種不同探針。4.不僅可用于分裂細胞染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)變化的研究，而且還可用于靜止期細胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。,FISH的技術(shù)特點：,FISH選用的標本可以是分裂期細胞染色體也可以是間期細胞。間期細胞可以是冰凍切片，也可以是細胞滴片或印片。生物素（Biotin）地高辛（digoxigenin ）, dinitrophenyl(DNP)，aminoacetyl fluore

6、ne(AAF)均可用于探針標記。,染色體著絲粒熒光,染色體端粒熒光,比較基因組雜交（CGH）,CGH不需要制備患者的染色體標本, 只需采用腫瘤患者的基因組DNA和正常人的基因組DNA作為探針，與正常人的中期染色體分裂相進行雜交。比較兩種探針所標的熒光信號的強度比率來判斷腫瘤患者的DNA是否存在缺失、增加或復制。 因而CGH最適合于檢測實體瘤, 淋巴瘤等不易得到高質(zhì)量染色體標本的疾病. CGH另一無法替代的優(yōu)點是, 它可在一次雜交中檢測

7、整個基因遺傳 物質(zhì)的增加或減少, 但精度有限, 對微小的擴增或缺失檢測不出, 僅適用于對整個基因組進行篩查. CGH也無法發(fā) 現(xiàn)平衡染色體易位.,FISH的臨床運用,在細胞遺傳學檢查中，重復序列的探針應(yīng)用最多，它們是α衛(wèi)星DNA、β衛(wèi)星DNA和經(jīng)典衛(wèi)星DNA探針。α衛(wèi)星DNA探針主要檢測人染色體的著絲粒。β衛(wèi)星DNA位于頂端著絲粒染色體及染色體的異染色質(zhì) 周圍。經(jīng)典衛(wèi)星DNA有著AATGG短片段，位于染色體1、9、15、16和Y染

8、色體長臂異染色質(zhì)周圍，后兩處探針除了可用于染色體數(shù)目檢查外，還可用于上述部位精細改變的檢查。,FISH的臨床運用,白血病檢測中常用的FISH探針有單一序列探針, 著絲粒探針, 整條染色體探針, 常用方法有單標記FISH, 雙 標記FISH, 比較基因組雜交(CGH), M-FISH 和Rx-FISH等.各種FISH探針及方法均在白血病的診斷, 治療監(jiān)測, 預(yù)后估計和微小殘留病檢測中起重要作用,應(yīng)用實例,常規(guī)的染色體核型分析已廣泛用于各類

9、急、慢性白血病患者的骨髓染色體檢查。如M3型的t（15；17）、M2b型的t（8；21）、CML和部分ALL的Ph染色體等。 FISH技術(shù)已成功地用于t（15；17），t (8；21) 和Ph染色體等的檢測，并為人類基因組實驗室發(fā)現(xiàn)的新基因進行了定位。利用染色體涂抹技術(shù)，結(jié)合常規(guī)核型分析和CGH技術(shù)，確診了多例復雜的染色體異位。已用CGH技術(shù)，分別對高二倍體ALL的患者和CML患者進行了研究。CGH技術(shù)在實體瘤的DNA研究中