afgf對糖尿病難愈性潰瘍的影響

1、aFGF 對糖尿病難愈性潰瘍的影響,,研究背景,成纖維細(xì)胞生長因子是一個蛋白質(zhì)家族，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)至少已有23個成員。酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF)因其等電點為酸性而被稱為酸性成纖維細(xì)胞生長因子。,,aFGF具有廣泛的生物學(xué)作用，本次實驗主要研究的是其促進創(chuàng)傷愈合的作用。aFGF能誘導(dǎo)傷口附近的細(xì)胞如血管平滑肌、成纖維細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞的分裂、增殖，加速膠原纖維的合成，促進皮膚和黏膜創(chuàng)面愈合。,研究方法,1、糖尿病模型復(fù)制2、創(chuàng)面

2、模型制作 3、潰瘍形成后給藥 4、檢測IL-2的含量5、抗炎作用：對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的 影響,1. 糖尿病模型復(fù)制,（1）、3 月齡雄性普通級SD大鼠, 體重200～ 250 g, 實驗前12 h 禁食, 定量飲水。（2）、實驗當(dāng)日稱體重, 尾靜脈采血, 用血糖儀測定基礎(chǔ)血糖。,,（3）、按60m g/k g 體重腹腔注射1%鏈脲佐菌素。1h后恢復(fù)正常飲食。（4）、1 周后當(dāng)動物血糖濃度大于16.7mmo l/L

3、 時, 可認(rèn)為糖尿病模型復(fù)制成功。,2. 創(chuàng)面模型制作,（1）、每只大鼠以20%烏拉坦 (0.6 ml/100g) 腹腔推注麻醉后, 背部剃毛, 常規(guī)消毒。（2）、在無菌條件下用特制打孔器在鼠背中部脊柱兩側(cè)各打一圓孔, 深至皮下, 直徑1. 8cm , 創(chuàng)面面積為2. 54 cm2 。,,（3）、止血后以無菌紗布包扎, 單籠喂養(yǎng), 定量飲水。（4）、約四天后潰瘍形成。,3、潰瘍形成后給藥,（1）、取大鼠4只, 按上述方法制成潰

4、瘍后處死，取潰瘍組織進行病理切片。（2）、再取大鼠64只, 分成四組：空白對照組、陽性對照組、高劑量實驗組、低劑量實驗組。,,（3）、將已經(jīng)形成潰瘍的大鼠放于固定架上,乙醚麻醉。（4）、創(chuàng)面用0. 9 %生理鹽水棉球蘸拭后,高劑量組以AFGF涂敷于紗布上;低劑量組以AFGF涂敷于紗布上；空白對照組以生理鹽水紗布一層敷于其上；陽性對照組以b FGF（堿性成纖維生長因子）涂敷于紗布上。,,（4）、再以消毒紗布包扎固定,每日換藥1 次

5、。換藥前用1∶5000 呋喃西林清潔創(chuàng)面。（5）、創(chuàng)傷后7、14 每組處死3 只動物, 取創(chuàng)面組織進行病理學(xué)檢查。,,（6）、創(chuàng)傷后第30天處死余下的動物，取創(chuàng)面組織進行病理學(xué)檢查。（7）、從第四天開始每隔一天在換藥時用透明膜描記法記錄其創(chuàng)面面積。,4、檢測IL-2的含量,取創(chuàng)傷后第30天被處死的大鼠的血清用ELISA法檢測IL-2的含量。,5、對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響,（1）、取雄性小鼠40只，分為空白對照組、陽性對照組、

6、高劑量實驗組、低劑量實驗組。（2）、用二甲苯30µl 涂抹小鼠右耳廓前后兩面致炎，左耳廓作為對照。,,（3）、致炎后將藥物抹在小鼠致炎的耳廓，30分鐘后再涂抹一次，共涂2次。（4）、致炎后1小時處死小鼠，用直徑６㎜打孔器分別在鼠耳同一部位取下耳片，稱重。,,（5）、以左右耳片重量差計算腫脹度，并計算腫脹抑制率。,預(yù)期實驗結(jié)果,１、實驗組創(chuàng)傷愈合的時間大于陽性對照組的愈合時間。?。?、在同一時間點上取材后的病理切片實驗