應(yīng)用SCGE和RAPD技術(shù)檢測(cè)石油烴對(duì)糞海膽DNA的損傷效應(yīng).pdf

1、現(xiàn)今國(guó)內(nèi)外溢油事故頻發(fā),泄漏的石油對(duì)海洋生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染。本文以馬糞海膽為試驗(yàn)對(duì)象,利用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)和隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記技術(shù)(RAPD)檢測(cè)石油烴對(duì)其DNA的損傷效應(yīng),分別從細(xì)胞水平和分子水平研究石油烴對(duì)海洋生物的毒性效應(yīng),探討這兩種技術(shù)在海洋石油烴污染檢測(cè)中的可行性,為海洋生態(tài)環(huán)境污染早期預(yù)警與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供參考。
　　 以0#柴油梯度濃度和暴露天數(shù)為變量條件,利用SCGE技術(shù),在細(xì)胞水平上研究石

2、油烴對(duì)馬糞海膽DNA的損傷程度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0#柴油濃度在50mg/L時(shí),馬糞海膽的DNA出現(xiàn)了明顯的彗星拖尾現(xiàn)象,說(shuō)明0#柴油濃度在50mg/L時(shí)會(huì)對(duì)馬糞海膽的DNA造成一定的損傷。同時(shí),研究發(fā)現(xiàn)在50mg/L濃度下,暴露天數(shù)與細(xì)胞受損率、彗尾DNA百分含量(%DNAT)與DNA平均遷移長(zhǎng)度之間具有良好的相關(guān)性。
　　 以0#柴油梯度濃度和暴露天數(shù)為變量條件,利用RAPD技術(shù),在分子水平上研究石油烴對(duì)馬糞海膽DNA的損傷程度。為

3、了找到最佳的反應(yīng)體系,篩選出擴(kuò)增效果最好的隨機(jī)引物,得到更明顯的實(shí)驗(yàn)效果并提供對(duì)照組數(shù)據(jù),首先運(yùn)用RAPD技術(shù)對(duì)還未投毒的受試馬糞海膽進(jìn)行遺傳多樣性分析。通過(guò)分析找到了適合馬糞海膽進(jìn)行RAPD實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)反應(yīng)體系:25μL的RAPD反應(yīng)體系中,含Taq酶0.2μL、10×Buffer2.5μL、dNTP2μL、DNA模板1μL、引物1μL、ddH2O18.3μL。篩選出了15條擴(kuò)增效果好的隨機(jī)引物,利用這些引物對(duì)27個(gè)馬糞海膽的DNA進(jìn)行

4、擴(kuò)增,共擴(kuò)增出504條條帶,平均每個(gè)個(gè)體19條,擴(kuò)增所得的條帶顯示,多態(tài)位點(diǎn)占75.4%,個(gè)體之間的遺傳距離為0.2189-0.5307,平均遺傳距離為0.3254,可見(jiàn),馬糞海膽個(gè)體之間遺傳多樣性還是不錯(cuò)的。然后對(duì)該馬糞海膽投毒,這次運(yùn)用RAPD技術(shù)對(duì)投毒后的馬糞海膽進(jìn)行DNA損傷的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),只有當(dāng)0#柴油濃度為50mg/L時(shí),擴(kuò)增條帶產(chǎn)生了明暗度的變化,其中由引物S49和S67擴(kuò)增出的條帶變化尤為明顯,說(shuō)明石油烴對(duì)馬糞海膽DN