液相色譜-質譜聯(lián)用測定抗風濕類中藥中非法添加化學藥物成分

1、<p>　　液相色譜-質譜聯(lián)用測定抗風濕類中藥中非法添加化學藥物成分</p><p>　　【摘要】 目的建立快速、準確、高靈敏度的測定抗風濕類中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛分析方法。方法采用HPLC-DAD、UPLC/MS/MS法對非法摻入的化學藥物進行定性鑒別，并以HPLC測定含量。結果受試制劑中檢測到摻有氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛。結論此方法靈敏準確

2、，可作為抗風濕類中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的有效檢測方法。 </p><p>　　【關鍵詞】 高效液相色譜儀; 超高效液質聯(lián)用儀; 抗風濕類制劑; 阿司匹林; 氨基比林; 布洛芬; 雙氯芬酸鈉; 吲哚美辛</p><p>　　風濕性及類風濕性關節(jié)炎是常見病、多發(fā)病，而抗風濕類中藥多數(shù)顯效慢，需長期服用，但安全性高。解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥亦稱非甾體抗炎藥，其

3、中除苯胺類藥物外，絕大多數(shù)藥物兼有抗風濕作用，此外糖皮質激素類亦具有抗風濕及類風濕作用。這些西藥的共同特點是療效迅速，長期服用副作用大。患者希望服用副作用小，見效有快的藥品，造假者為迎合患者的這一需求，在中成藥中非法添加解熱鎮(zhèn)痛抗炎類或糖皮質激素類西藥。若患者在毫不知情的情況下長期、大量服用這種所謂的純中藥制劑，勢必造成身體健康的損傷。為有效打擊此種制假摻偽的不法行為，保證臨床用藥安全，本文參考有關文獻[1～5]，研究建立了測定阿司匹林

4、、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的檢驗方法，通過HPLC-DAD、UPLC/MS/MS確認，可快速準確地判斷中藥制劑中是否非法摻入上述化學藥物，可供藥監(jiān)、藥檢部門開展工作時參考。</p><p><b>　　1 儀器與試藥</b></p><p>　　Agilent 1100高效液相色譜儀，沃特世(Waters)ACQUITY UPLC Quattro Mic

5、roTM超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質譜聯(lián)用儀，MassLynxTM 4.1質譜工作站軟件;AL204型電子天平(Mettler Toledo)。UP超純水制備系統(tǒng)。流動相所用甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其余所用試劑為分析純。阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，抗風濕類中藥樣品為市場監(jiān)督抽樣。</p><p><b>　　2 方法與結果</b&g

6、t;</p><p>　　2.1 色譜條件色譜柱為Watres Sunfire C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm);以乙腈為流動相(A)，以0.02 mol/L NH4Ac-0.05%HAc溶液為流動相(B)，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫;檢測波長230 nm;體積流量1.0 ml/min;進樣量10 μl，柱溫30℃;理論板數(shù)按5個峰計均不低于3 000;分離度應大于3。梯度洗脫表見表1。

7、</p><p><b>　　表1 梯度洗脫</b></p><p>　　時間t/min流動相A(%)流動相B(%)0109086040203070</p><p>　　2.2 質譜條件電噴霧電離源(ESI)，毛細管電壓3.5 kV，孔電30 V，萃取電壓2.0 V，透鏡電壓1.0 V;源溫120℃，脫溶劑溫度350℃;脫溶劑氣體流速500 L

8、/h，孔氣體流速50 L/h，正、負離子同時檢測，掃描方式采用全掃描一級質譜、全掃描二級質譜(MS/MS)，質量采集范圍100～500。</p><p>　　2.3 對照品溶液的制備精密稱取阿司匹林、布洛芬對照品各60 mg，氨基比林、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對照品各20 mg置同一個100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10 min,搖勻，作為對照品貯備溶液，精密量取對照品貯備溶液1 ml置10 ml容量瓶中，

9、加甲醇至刻度，搖勻，即得。</p><p>　　2.4 供試品溶液的制備若供試品為片劑或丸劑，應細致研磨粉碎，稱取約0.3 g，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml,稱重,超聲處理20 min,放冷,用甲醇補足減失重量;若供試品為膠囊，取出內容物,細致研磨粉碎，稱取約0.3 g，置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50 ml，稱重,超聲處理20 min,放冷,用甲醇補足減失重量;若供試品為液體，量取5 ml于50 ml

10、容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。取上述樣品溶液適量，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。</p><p>　　2.5 線性關系考察精密稱取阿司匹林61.47 mg，布洛芬38.41 mg，氨基比林20.25 mg,雙氯芬酸鈉20.07 mg,吲哚美辛20.09 mg置100 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理10 min,搖勻，作為對照品儲備溶液，精密量取對照品儲備溶液適量稀釋成系列濃度的溶液，作為對照品溶

11、液，分別精密吸取系列對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，測定，即得。見表2。</p><p>　　表2 對照品標準曲線</p><p>　　對照品回歸方程r線性范圍/μg·ml-1阿司匹林Y=2.92e+004X + 1.35e+0050.995 630.735～307.35氨基比林Y=9.00e+003 X - 2.45e+0020.999 810.125～101.25布洛芬

12、Y=5.20e+004 X + 1.10e+0040.999 519.205～192.05雙氯芬酸鈉Y=1.83e+004 X + 5.57e+0030.999 610.35～100.35吲哚美辛Y=1.82e+004 X + 5.24e+0030.999 510.45～100.45</p><p>　　2.6 回收率實驗取抗風濕中藥樣品0.15 g，各6份，精密稱定,置25 ml量瓶中,分別加上述對照儲備溶液6

13、,7.5,9 ml分別加甲醇至刻度,超聲處理20 min,放冷,搖勻,濾過, 進行測定，計算加樣回收率，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛的平均回收率分別為94.25%，99.67%，95.31%，97.68%，98.09%，RSD分別為3.12%，1.45%，1.99%，1.19%，1.38%。</p><p>　　2.7 檢測限取“2.5”項下低濃度混合對照品溶液，逐漸稀釋，依法測定，當信噪比(

14、S/N)為3時，阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛檢測限分別為91 ng，252 ng，1.056μg，558 ng，1.092 μg。</p><p>　　2.8 樣品測定經對多批次對抗風濕類中藥制劑進行檢測，結果在風濕靈膠囊、風痛寧片及某私人診所配制的抗風濕制劑供試品溶液的液相色譜中呈現(xiàn)與對照品色譜圖保留時間有相一致的色譜峰，同時對與對照品色譜保留時間一致的色譜峰，利用DAD分析紫外光譜圖，結果

15、光譜圖也與對照品一致，對檢測到的成分進行了定量，結果是：風濕靈膠囊含布洛芬2.08%、雙氯芬酸鈉1.94%、吲哚美辛1.05%;風痛寧片含雙氯芬酸鈉1.27%;某私人診所配制的抗風濕制劑含氨基比林0.89%。對照品色譜圖及UV光譜圖見圖1～2。</p><p>　　2.9 質譜確證為保證檢驗結果準確無誤，對可疑陽性樣品進行了質譜確證，供試品中在與氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛對照品色譜保留時間及光譜圖都相

16、一致的樣品進行質譜分析，結果供試品中一級質譜分子離子峰及二級質譜主要碎片離子都與對照品的一級質譜分子離子峰及二級質譜主要碎片離子相一致，即氨基比林(232.1、159.1、113.1)、布洛芬(205.2、161.2)、雙氯芬酸鈉( 294.0、250.0、214.0)、吲哚美辛(356.0;312.1、297.1、270.1)。對照品質譜圖見圖3。</p><p><b>　　圖3 對照品質譜圖<

17、;/b></p><p><b>　　3 結論</b></p><p>　　由于中藥組分的復雜性，所以有必要采用高選擇性的分析手段。本法可快速、準確地對中藥制劑中非法添加阿司匹林、氨基比林、布洛芬、雙氯芬酸鈉、吲哚美辛同時進行檢測，專屬性強，5種化學藥物可達基線分離。本法同時提供對照品和樣品分子離子峰、二級質譜碎片和液相色譜保留時間及UV光譜信息，對化學物質達到

18、準確定性、定量檢測，先進可行，可作為抗風濕類中藥制劑中質量和安全用藥的控制。</p><p><b>　　【參考文獻】</b></p><p>　　[1] 劉起中，李慧義，杭太俊.中藥制劑中非法摻入化學藥物成分的測定[J].中國藥師，2007，10(8)：735.</p><p>　　[2] 王連水，姜建國，張西如，等. 液相色譜-質譜聯(lián)用法檢

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