豬孤雌胚早期不同發(fā)育階段基因差異表達的初步研究.pdf

1、胚胎在早期發(fā)育過程中，其形態(tài)和生理會發(fā)生很多的變化，包括對后期胚胎發(fā)育潛能起決定作用的第一次卵裂、合子基因組的激活、桑葚胚的致密化和囊胚的形成等。這些轉變過程往往都伴隨著與發(fā)育相關基因的差異表達與調控，對豬卵母細胞激活及孤雌胚發(fā)育進行研究的目的，正是為了更好的了解哺乳動物胚胎早期發(fā)育過程中基因差異表達的情況，以期為哺乳動物胚胎發(fā)育分子調控機制的研究提供參考。同時這對深入細致地研究動物克隆技術，建立孤雌哺乳動物品系以及加速家畜育種進程等均

2、具有重要意義。
　　 豬胚胎培養(yǎng)的相關資料顯示，現在的體外培養(yǎng)條件不能完全模擬體內的環(huán)境[l]。因此，通過比較同一類細胞在不同生理狀態(tài)下或在不同生長發(fā)育階段的基因表達差異，可為分析生命活動過程提供重要信息。為了鑒別和分離早期孤雌發(fā)育的胚胎表達差異的基因，了解體外產生的早期胚胎mRNA表達模式，本研究主要利用了DDRT-PCR(differential display reversetranscription polymerase

3、 chain reaction，DDRT-PCR)技術，來分析豬體外成熟的早期孤雌激活胚，包括2-細胞胚胎、4-細胞胚胎、桑葚胚以及囊胚等四個時期的胚胎mRNA的表達，并且需分離得到各個時期特異性表達的基因片段。為此，我們分別提取了豬早期發(fā)育的2-細胞胚胎（60個）、4-細胞胚胎（60個）、桑葚胚（63個）以及囊胚(61個)的總RNA，按照應有的體系反轉錄。然后將各個時期的反轉錄產物進行PCR擴增，經過聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacr

4、ylamide gel electrophoresis，PAGE)分離并銀染后，回收共得到22條早期胚胎的差異表達片段，其中僅有11條在二次擴增時可以重復出現，最終對10個差異表達基因進行了克隆并送去測序。將8個測序結果經過BLAST比對后發(fā)現，有7條差異表達片段分別比對上了人上皮型鈣粘附蛋白(E-cadherin)基因、歐洲野豬的CWF19-L2基因、小鼠Amdl(adenosylmethionine decarboxylase l)