益母草野生品和栽培品中水蘇堿的含量比較研究

1、<p>　　益母草野生品和栽培品中水蘇堿的含量比較研究</p><p>　　作者：高言明，賈憲生，楊玉琴，李健，張麗艷，何平，李榮宇</p><p>　　【摘要】 目的考察益母草野生品和栽培品中水蘇堿的含量，為人工種植益母草提供依據(jù)。方法采用薄層掃描法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果栽培品中水蘇堿含量普遍比野生品中的水蘇堿含量高。結(jié)論益母草栽培品比野生品質(zhì)量好。 </p><

2、p>　　【關(guān)鍵詞】 益母草；鹽酸水蘇堿；薄層掃描</p><p>　　益母草來源于唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鮮或干燥的地上部分，為婦科經(jīng)產(chǎn)要藥［1，2］。為考察黔產(chǎn)益母草野生品和栽培品的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定益母草中主要有效成分鹽酸水蘇堿的含量對(duì)益母草野生品和栽培品的質(zhì)量進(jìn)行比較，為人工種植益母草提供依據(jù)，達(dá)到提高益母草藥材質(zhì)量的目的。</p>&l

3、t;p><b>　　1 儀器與試藥</b></p><p>　　CS-9301PC雙波長(zhǎng)飛點(diǎn)層析掃描儀（日本島津公司）；CAMAG LINOMAT V半自動(dòng)點(diǎn)樣儀（瑞士卡馬公司）；定量毛細(xì)管（美國(guó)MICROCAPS公司）；XS205雙量程電子分析天平， 量程：萬分之一和十萬分之一兩檔（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；硅膠G板（青島海洋化工廠）。鹽酸水蘇堿對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢

4、定所，批號(hào)：110712-200407；其他化學(xué)試劑均為分析純；藥材紅花益母草Leonurus japonicus Houtt. 和白花益母草Leonurus sibiricus分別采自貴州省惠水、大方縣和貴陽市郊烏當(dāng)，藥材樣品均經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院魏升華講師鑒定。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b></p><p>　　2.1 供試品溶液和對(duì)照品溶液的制

5、備 </p><p>　　精密稱取干燥益母草樣品粉末約1 g，置圓底燒瓶中，加入乙醇約50 ml，加熱回流1.5 h，放冷，濾過，濾渣及回流容器用乙醇50 ml分次洗滌，合并濾液和洗液，蒸干，殘?jiān)靡掖既芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心（5000 r/min，5 min），取上清液作為供試品溶液。精密稱取在105°干燥3 h的鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，加乙醇制成每毫升含2.030

6、mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。</p><p>　　2.2 薄層色譜分析條件［3,4］</p><p>　　用硅膠G薄層板，點(diǎn)狀點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量10 μl。以正丁醇-鹽酸-醋酸乙酯(8∶3∶1)為展開劑，展開，取出晾干后，在 105℃加熱15 min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-1％三氯化鐵乙醇溶液(10∶1)混合溶液至斑點(diǎn)顯色清晰，晾干，立即在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布密封。反射法

7、單波長(zhǎng)鋸齒形掃描。波長(zhǎng)λS=510 nm，狹縫0.4 mm×0.4 mm。在上述分析條件下對(duì)薄層色譜進(jìn)行掃描分析。結(jié)果見圖1～2。</p><p>　　2.3 線性關(guān)系的考察 </p><p>　　用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)鹽酸水蘇堿對(duì)照溶液2，4，6，8，10，12，14 μl，用上述條件展開顯色后進(jìn)行薄層掃描測(cè)定，以點(diǎn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，求出

8、回歸方程為：Y= 185.75X - 411.09，r=0.996，表明鹽酸水蘇堿在4.06～28.42 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由于直線不通過原點(diǎn)，因此用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。</p><p>　　2.4 穩(wěn)定性考察 </p><p>　　在同一塊薄層板上分別點(diǎn)8 μl樣品溶液和10 μl對(duì)照品溶液，依上述色譜條件和掃描條件操作，分別在0，0.5，1，1.5，2 h掃描測(cè)定鹽酸水蘇堿峰面

9、積，結(jié)果峰面積的RSD為0.38%，表明鹽酸水蘇堿在本實(shí)驗(yàn)條件下2 h內(nèi)穩(wěn)定。</p><p>　　2.5 同板精密度實(shí)驗(yàn)在同一薄層板上點(diǎn)供試品溶液5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)10μl，并以鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液3，8 μl作為隨行標(biāo)準(zhǔn)，按上述分析條件對(duì)每個(gè)斑點(diǎn)分析測(cè)定，以峰面積計(jì)算，RSD為1.00%，表明同板精密度良好。</p><p>　　2.6 異板精密度實(shí)驗(yàn)</p><p

10、>　　在5塊薄層板上，分別點(diǎn)供試品溶液5個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)10 μl，并以鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液3μl和8μl作為隨行標(biāo)準(zhǔn)，分別掃描測(cè)定其峰面積，按上述分析條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算，RSD為1.90%，表明異板精密度良好。</p><p>　　2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)</p><p>　　分別稱取同一批益母草藥材5份，按“2.1”和“2.2”項(xiàng)操作，按上述條件分析測(cè)定鹽酸水蘇堿，得平均含量為1.0

11、9%，RSD為2.52%。</p><p>　　2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) </p><p>　　精密稱取鹽酸水蘇堿平均含量為1.09%的益母草藥材5份，每份約0.5 g，精密加入鹽酸水蘇堿對(duì)照品5.00 mg，同時(shí)加入約50 ml乙醇回流提取，按“2.1”項(xiàng)方法進(jìn)行供試品溶液的制備，按“2.2”項(xiàng)進(jìn)行展開和掃描測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1 回收率實(shí)驗(yàn)（略）</p>

12、<p>　　2.9 樣品測(cè)定 </p><p>　　按上述分析條件對(duì)不同品種和不同生長(zhǎng)條件的益母草中鹽酸水蘇堿的含量進(jìn)行分析。結(jié)果見表2。表2 不同品種和不同生長(zhǎng)條件的益母草中鹽酸水蘇堿的含量</p><p><b>　　（略）</b></p><p><b>　　3 討論</b></p>&

13、lt;p>　　表2中益母草開花前后其主要有效成分鹽酸水蘇堿含量相差較大，這也驗(yàn)證了童子益母草的質(zhì)量高于非童子益母草的說法，同時(shí)也說明益母草的采收應(yīng)在開花前較好。</p><p>　　益母草分白花和紅花兩個(gè)種，開花前兩者不易分辨，如采收野生童子益母草往往是兩者的混品，而兩者的內(nèi)在質(zhì)量是否相同是值得研究的一個(gè)問題。如果采用人工栽培，可根據(jù)需要進(jìn)行分別種植，質(zhì)量也就可以得到控制。</p><p

14、>　　本實(shí)驗(yàn)人工種植的益母草采用在多年栽種蔬菜的農(nóng)田中進(jìn)行栽種，土壤肥力往往比荒野土壤好，所以其中鹽酸水蘇堿的含量也相對(duì)較高。表2中編號(hào)為050724的白花益母草是在野外環(huán)境較濕潤(rùn)的腐質(zhì)土上播撒白花益母草種子后任其生長(zhǎng)，其中鹽酸水蘇堿的含量也較高，說明益母草中主要有效成分鹽酸水蘇堿的含量主要與其生長(zhǎng)環(huán)境的土壤肥力有很大關(guān)系，如果采用人工種植，應(yīng)選用肥力較好的土壤或注意施肥，益母草的質(zhì)量才能得到保證。</p><

15、p>　　在實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)對(duì)展開后的薄層板于噴顯色劑前在105℃溫度下烘烤時(shí)間控制較重要，當(dāng)烘烤時(shí)間大于或小于15 min時(shí)，噴顯色劑后斑點(diǎn)顯色均不及15 min清晰，因此建議使用本實(shí)驗(yàn)采用的方法時(shí)，要注意掌握烘烤時(shí)間。</p><p>　　經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本文采用的展開系統(tǒng)分離度好，斑點(diǎn)清晰，方法簡(jiǎn)便，且含量測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】<

16、/b></p><p>　　1］范美華，王健鑫，李 鵬，等.益母草的研究進(jìn)展［J］.中藥藥物與臨床，2006，6（7）：528. </p><p>　?。?］張嫻，彭國(guó)平.益母草屬化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（2）：162.</p><p>　?。?］金陽. TLCS法測(cè)定復(fù)方益母草顆粒中鹽酸水蘇堿的含量［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐