不結(jié)球白菜自交不親和相關(guān)基因克隆和S單元型的鑒定.pdf

1、不結(jié)球白菜雜種優(yōu)勢明顯，自交不親和是不結(jié)球白菜雜種優(yōu)勢利用的一種重要途徑。本研究結(jié)合親和指數(shù)法和限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法，利用不結(jié)球白菜SRK基因的多態(tài)性對不結(jié)球白菜的自交不親和性及S單元型進(jìn)行鑒定研究，同時對材料的SLG基因和SRK基因片段分別進(jìn)行了克隆分析，并利用熒光定量PCR技術(shù)分析SLG基因和SRK基因的表達(dá)。為不結(jié)球白菜自交不親和性雜優(yōu)利用、了解SLG和SRK基因在十字花科中的進(jìn)化、不結(jié)球白菜自交不親和

2、性機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 1.依據(jù)甘藍(lán)SRK基因保守序列設(shè)計SRK特異引物并進(jìn)行驗證，通過PCR-RFLP法分析16份不結(jié)球白菜自交系材料的SRK基因的多態(tài)性，根據(jù)其差異對不結(jié)球白菜S單元型及自交不親和性進(jìn)行研究.結(jié)果表明：16個不結(jié)球白菜自交系SRK基因共產(chǎn)生6種不同的帶型，其中有1個是強(qiáng)自交不親和系，4個是弱自交不親和系，且與田間測定的親和指數(shù)相符，從而說明利用SRK基因的多態(tài)性鑒定不結(jié)球白菜純合自交系的自交不親和性和S

3、單元型是可行的。同時對部分材料的SRK基因的核苷酸序列進(jìn)行分析驗證，表明相同類型SRK基因序列一致性較高，且SRK基因存在明顯的單核苷酸多態(tài)性，為進(jìn)一步自交不親和性的研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 2.以不結(jié)球白菜自交不親和系為材料，采用RT-PCR技術(shù)，用特異引物對SLG基因進(jìn)行克隆，獲得SLG基因cDNA序列長度為1324bp，命名為BcSLG。序列分析表明：所獲得的不結(jié)球白菜BcSLG基因cDNA序列包含一完整的編碼框，編碼432

4、個氨基酸，含有12個保守的半胱氨酸殘基和7個N-糖基化位點(diǎn)。序列比對和系統(tǒng)進(jìn)化分析表明：BcSLG與其它植物的SLG基因氨基酸序列具有較高的同源性，與大白菜和甘藍(lán)親緣關(guān)系最近。熒光定量PCR分析表明：BcSLG基因在自交不親和系的柱頭中表達(dá)量最高，其次是花蕾，葉片中表達(dá)最低，在自交親和系的柱頭、花蕾和葉片中相對表達(dá)較低。
　　 3.采用PCR和RT-PCR技術(shù)，分別以不結(jié)球白菜自交不親和系的基因組DNA和柱頭cDNA為模板進(jìn)行克

5、隆，獲得的SRK基因片段長度分別為964bp和644bp。序列比較分析表明：所得不結(jié)球白菜SRK基因的DNA和cDNA序列分別與大白菜、甘藍(lán)和油菜等SRK基因具有較高的序列相似性，SRK基因的激酶域序列包括4個外顯子和3個內(nèi)含子，且3個內(nèi)含子剪切位點(diǎn)符合經(jīng)典的GT-AT規(guī)則。熒光定量PCR分析結(jié)果表明：不同材料的不同組織中SRK基因的表達(dá)水平存在顯著的差異，SRK基因主要在自交不親和系的柱頭中高度表達(dá)，在自交親和系中該基因的表達(dá)主要分布