日本鰻鱺組織器官抗菌肽的分離與鑒定.pdf

1、日本鰻鱺(Anguilla japonica)是中國主要的鰻鱺養(yǎng)殖品種之一。在目前高密度集約化養(yǎng)殖過程中病害時有發(fā)生,反復(fù)使用抗生素等化學(xué)藥物防治疾病導(dǎo)致耐藥致病菌株的出現(xiàn)等一系列嚴(yán)重的問題,尋找天然、高效、廣譜和細(xì)菌不易產(chǎn)生耐藥性的藥物來替代傳統(tǒng)化學(xué)藥物是魚病防治研究的重要方向之一。魚類的非特異性免疫因子,尤其是抗菌肽,因其天然性、抗菌譜廣、抗菌活性強等諸多優(yōu)點,且其作用機理主要是通過破壞細(xì)菌細(xì)胞膜,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)含物外泄而殺滅細(xì)菌,細(xì)菌

2、難以對其產(chǎn)生耐藥性,因而有望替代傳統(tǒng)抗生素類藥物,抗菌肽的研究已成為醫(yī)藥及分子免疫學(xué)的研究熱點。本文比較日本鰻鱺不同組織器官的抗菌活性,并分析其抗菌活性組分,在此基礎(chǔ)上選擇抗菌活性較大的肝臟采用液相色譜進(jìn)行分離純化,獲得純度較高的抗菌肽類物質(zhì)。
　　 ⑴鰻鱺不同組織器官抗菌活性比較及抗菌組分分析：用10％醋酸提取日本鰻鱺肝臟、鰓、脾臟、膽汁、腎臟和血清中的抗菌活性物質(zhì),檢測其對養(yǎng)殖鰻鱺常見的四種致病菌,即腸桿菌Enterobac

3、ter sp.(B01)、遲緩愛德華氏菌Edwardsiella tarda(B09)、氣單胞菌屬Aeromona sp.(B18)和嗜水氣單胞菌Aeromona hydrophila(B27)的抑殺作用。結(jié)果顯示,肝臟、脾臟、膽汁和鰓的樣品對四株試驗菌株均有明顯的抑菌作用,腎臟對B18、B27和B01三株致病菌有抑菌作用,血清僅對B18有抑菌作用。不同樣品對同一種致病菌的抗菌活性差異顯著(P＜0.05),按平均抑菌圈半徑計算,其抗菌活

4、性大體呈現(xiàn)為:肝臟＞鰓＞脾臟＞膽汁＞腎臟＞血清。同一樣品對不同細(xì)菌的抑殺作用差異顯著(P＜0.05)。采用反相高效液相色譜法分析上述各組織器官的醋酸提取物中的活性組分,結(jié)果顯示:肝臟、脾臟、膽汁和鰓樣品中的活性組分(以殺傷指數(shù)大于50％計)主要集中于乙腈洗脫濃度為19.4％-35.4％,腎臟和血清中組分無明顯抗菌活性(殺傷指數(shù)小于50％)。本研究為以后研究鰻鱺等魚類抗菌活性組分提供重要的參考依據(jù)。
　　 ⑵鰻鱺肝臟中抗菌肽的分離

5、與鑒定：采用10 kDa纖維柱切向流超濾10％醋酸提取日本鰻鱺肝臟的抗菌活性物質(zhì),檢測其對養(yǎng)殖鰻鱺常見的四株致病菌B01、B09、B18、B27的抑殺作用。結(jié)果顯示,小分子蛋白(＜10 kDa)抗菌活性大于大分子蛋白(≥10 kDa部分)抗菌活性,但是兩部分抗菌活性無顯著性差異(P＞0.05);同一部分樣品對不同菌株抗菌活性也各不相同,對B18菌的抑殺作用最強。對小于10 kDa部分采用陽離子交換層析和反相高效液相色譜層析等方法進(jìn)一步層