雙層膜栽培對(duì)葡萄葉片主要生理生化特性的影響【畢業(yè)論文】

1、<p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）</p><p>　　論文題目：雙層膜栽培對(duì)葡萄葉片主要生理生化特性的影響</p><p>　　所在學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物工程 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) &

2、lt;/p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 日</p><p>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠(chéng)信承諾書(shū)</p><p>　　1．本人承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)），是在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下嚴(yán)格按照學(xué)校和學(xué)院有關(guān)規(guī)定完成的，引用他人的觀點(diǎn)和參

3、考資料均加以注釋和說(shuō)明。</p><p>　　2．本人鄭重地承諾所上交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）沒(méi)有抄襲他人研究（設(shè)計(jì)）成果和偽造相關(guān)數(shù)據(jù)等行為。</p><p>　　3．畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）若有侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。</p><p>　　學(xué)生簽名： __________</p><p>　　日 期： _________

4、</p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　在我國(guó)南方地區(qū)，特別是在浙江沿海地區(qū)利用大棚設(shè)施栽培葡萄，不僅改變了露天葡萄不能栽培的狀況，而且達(dá)到提早上市，增加收入等目的，已經(jīng)成為一種發(fā)展趨勢(shì)。但南方沿海頻繁的臺(tái)風(fēng)襲擊，使大棚葡萄常面臨危害。為了使葡萄避開(kāi)臺(tái)風(fēng)更早成熟上市，進(jìn)行了雙層膜栽培試驗(yàn)。</p><p>　　本文以

5、甬優(yōu)一號(hào)和夏黑兩個(gè)品種的葡萄葉作為材料，研究了雙單層膜對(duì)葡萄葉片主要生理生化特性的影響，包含超氧化物歧化酶（SOD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）、過(guò)氧化氫酶（CAT）的活性及葉綠素含量等。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雙單層膜對(duì)葡萄葉片生理生化特性有較大影響。試驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，不同品種對(duì)葡萄葉片酶的活性也有較大影響。綜合上述實(shí)驗(yàn)證明，雙單層膜和不同品種都會(huì)會(huì)影響葡萄葉片主要抗氧化酶活性和葉綠素含量，從而影響葡萄的生長(zhǎng)發(fā)育。</p&g

6、t;<p>　　關(guān)鍵詞：葡萄；雙層膜；單層膜；不同品種；生理生化特性</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　In the southern region of China, especially in the coastal areas of Zhejiang using plastic greenhouse cult

7、ivation of grapes, which not only changed the open-air cultivation condition, but also increased income, has become a development trend, but frequent typhoons in the southern coastal, which is often harmful to greenhouse

8、 grape. In order to avoid typhoon, early mature grape cultivation with double-membrane were performed.</p><p>　　Grape leaf of two varieties Yongyou No.1 and Summer Black were used to investigate the main eff

9、ects on the physiological and biochemical characteristics of grape leaves of double monolayers, including superoxide dismutase (SOD), phenylalanine ammonia lyase (PAL), polyphenol oxidase (PPO), catalase (CAT) activity a

10、nd chlorophyll content. It was found that two monolayers had great influence on grape leaf physiological and biochemical characteristics. The results show that, grape leaf of different </p><p>　　Keywords: Gr

11、ape; Membrane; Monolayer; Different varieties; Physiological and Biochemical characteristics</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p><b>　　2

12、材料與方法2</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑2</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料2</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑2</p><p>　　2.1.3 主要儀器及設(shè)備3</p><p>　　2.1.4 其他用品3</p><p>　　2

13、.1.5 主要試劑配制3</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法4</p><p>　　2.2.1 物候期觀測(cè)4</p><p>　　2.2.2 樣品的采集與預(yù)處理4</p><p>　　2.2.3 主要生理生化特性測(cè)定4</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析7</b></p

14、><p>　　3.1 不同覆膜處理對(duì)葡萄物候期的影響7</p><p>　　3.2 雙層膜處理對(duì)葡萄葉片超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響8</p><p>　　3.3 雙層膜處理對(duì)葡萄葉多酚氧化酶（PPO）活性的影響10</p><p>　　3.4 雙層膜處理對(duì)葡萄葉過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的影響11</p><p&

15、gt;　　3.5 雙層膜處理對(duì)葉綠素含量的影響12</p><p><b>　　4 結(jié)論14</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)15</b></p><p><b>　　致 謝17</b></p><p><b>　　1 前言</b>&

16、lt;/p><p>　　大棚葡萄栽培解決了長(zhǎng)期以來(lái)困擾我國(guó)南方露地葡萄栽培上病害多，座果率低，品種單調(diào)及品質(zhì)次四大難題。使葡萄提早或延后成熟并使露地難以栽培歐亞種葡萄栽培得以成功，通過(guò)大棚栽培還可以確保葡萄充分成熟采收，提高品質(zhì)。</p><p>　　葡萄冬季休眠需低溫時(shí)數(shù)7.2℃以下約1500－2000小時(shí)，充分的低溫休眠可提高發(fā)芽和開(kāi)花的整齊度[1]。在江浙滬常年月1月底至2月上旬結(jié)束休眠

17、，因而2月上旬是保溫（不加溫）大棚覆膜的最佳時(shí)期，此時(shí)已避開(kāi)全年最低溫度（1月），溫度開(kāi)始緩慢上升，充分利用光能，利于蓄熱保溫。如在冬季落葉后（1-12月），用20%石灰氮液處理一年生枝芽，對(duì)葡萄有明顯的提早一周左右破眠[2]、萌芽、開(kāi)花、結(jié)果的效應(yīng)。對(duì)保溫或加溫大棚均適當(dāng)提早覆蓋。石灰氮先用溫水?dāng)嚢枞芙?，沉淀后的清液，隨時(shí)隨用，可用毛刷涂刷休眠的芽眼，而對(duì)花質(zhì)量無(wú)不良影響。在選擇薄膜時(shí)，薄膜的強(qiáng)度高低地南方大棚葡萄栽培的重要因素，夏季

18、高溫、強(qiáng)紫外線照射使用薄膜迅速老化，經(jīng)初秋臺(tái)風(fēng)襲擊使薄膜損壞漏水，導(dǎo)致果實(shí)發(fā)生病害。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的高強(qiáng)度塑料薄膜地理想的抗老長(zhǎng)壽膜。早熟品種從2月覆蓋到8月果實(shí)采收后揭膜；晚熟品種從3月覆蓋至9月果實(shí)采收，歷時(shí)均不越過(guò)半年，長(zhǎng)壽膜老化不明顯，因而可以連續(xù)使用2季（2年）[3]。但晚熟品種每檔棚架均需加上壓膜線，以增加抗風(fēng)能力，膜取下需第上標(biāo)簽注明棚號(hào)，以備用來(lái)年蓋在相同棚上，大棚膜幅以8米為宜，可以直接覆蓋兩側(cè)，</p>

19、<p>　　本文是以甬優(yōu)一號(hào)和夏黑兩種的葡萄葉片在雙單層膜的情況下為材料。采用高速冷凍離心和比色法[6]等方法，研究雙單層膜和不同品種對(duì)葡萄葉片主要生理生化特性（如超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、過(guò)氧化氫酶的活性及葉綠素含量等）的影響，為葡萄早熟優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)研究提供參考。</p><p>　　“甬優(yōu)1號(hào)”是我市自主選育出的藤稔“芽變”新品種。該品種成熟早、抗性強(qiáng)、肉質(zhì)脆、風(fēng)味甜、果實(shí)商品性好，設(shè)施栽培情況下

20、可一年二熟。2006年，“甬優(yōu)1號(hào)”被評(píng)為“寧波市十大名果”，目前市場(chǎng)批價(jià)已高達(dá)10元/Kg以上，畝效益超過(guò)萬(wàn)元，極具推廣前景。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑</p><p>　　2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)所用的材料是以甬優(yōu)一號(hào)和夏黑

21、兩個(gè)品種的葡萄葉片進(jìn)行生理生化的研究。用編號(hào)1~8表示葡萄樣品。具體樣品見(jiàn)表1。</p><p>　　表1 實(shí)驗(yàn)樣品一覽表</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑</p><p>　　表2 實(shí)驗(yàn)試劑一覽表</p><p>　　2.1.3 主要儀器及設(shè)備</p><p>　　表3 主要儀器設(shè)備</p>

22、<p>　　2.1.4 其他用品</p><p>　　研缽、容量瓶（500mL、250mL、100mL、50mL、25mL）、量筒（500mL、100mL、10mL）、燒杯（1L、500mL、100mL）、移液管（0.5mL、1mL、5mL）、移液槍、洗耳球、蒸餾水、手術(shù)剪刀、一次性手套、一次性橡膠手套。</p><p>　　2.1.5 主要試劑配制</p>&

23、lt;p>　?。?）130mmol/L甲硫氨酸（Met）溶液：稱取1.9399g Met，用磷酸緩沖液定容至100mL。</p><p>　?。?）750µmol/L氮藍(lán)四唑溶液（NBT）：稱取0.06133g NBT，用磷酸緩沖液定容至100mL，避光保存。</p><p>　?。?）100µmol/L EDTA-Na2溶液：稱取0.03721g EDTA-Na

24、2，用磷酸緩沖液定容至1000mL。</p><p>　?。?）20µmol/L核黃素溶液：稱取0.0753g核黃素，用蒸餾水定容至1000mL，避光保存。</p><p>　　（5）0.02mol/L苯丙氨酸溶液：稱取3.3038g苯丙氨酸，用0.1mol/L pH8.8硼酸緩沖液定容至1000mL。</p><p>　?。?）0.1mol/L鄰苯二酚溶

25、液：稱取1.1011g鄰苯二酚，用蒸餾水定容至100mL。</p><p>　　（7）0.1mol/L H2O2溶液：市售30% H2O2大約等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68mL，稀釋至1000mL，用標(biāo)準(zhǔn)0.1mol/L高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）進(jìn)行標(biāo)定。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p

26、>　　2.2.1 物候期觀測(cè)</p><p>　　物候期觀察采用田間調(diào)查法進(jìn)行，每品種隨機(jī)選取5棵生長(zhǎng)正常的樹(shù)，從2010年2月開(kāi)始直至葡萄開(kāi)始落葉為止，記錄每個(gè)品種的物候期如傷流期、萌芽期、開(kāi)花期、漿果生長(zhǎng)期和漿果成熟期[7]等，并統(tǒng)計(jì)從發(fā)芽到成熟的天數(shù)。</p><p>　　2.2.2 樣品的采集與預(yù)處理</p><p>　　試驗(yàn)于2011年在江北地區(qū)進(jìn)行

27、，在5月到8月期間，隔一段時(shí)間，采取樣品，對(duì)不同樣品進(jìn)行分裝并冷藏于-40℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　2.2.3 主要生理生化特性測(cè)定</p><p>　　2.2.3.1 超氧化物歧化酶（SOD）活性</p><p>　　超氧化物歧化酶的活性采用氮藍(lán)四唑（NBT）[9]光化還原法測(cè)定。該方法依據(jù)超氧化物歧化酶抑制氮藍(lán)四唑在光下的還原作用來(lái)確定酶活性大小。

28、在有氧化物質(zhì)存在下，核黃素可被光還原，被還原的核黃素在有氧條件下極易再氧化而產(chǎn)生超氧陰離子自由基，超氧陰離子自由基可將氮藍(lán)四唑還原為藍(lán)色的甲腙，后者在560nm處有最大吸收峰。而SOD可清除超氧陰離子自由基，從而抑制了甲腙的形成，其抑制強(qiáng)度與酶活性再一定范圍內(nèi)成正比。于是光還原反應(yīng)后，反應(yīng)液藍(lán)色愈深，說(shuō)明酶活性愈低，反之酶活性愈高。據(jù)此可以計(jì)算出酶活性大小。SOD活性單位是抑制氮藍(lán)四唑光化還原的50%為一個(gè)酶活性單位表示?？砂匆韵鹿接?jì)

29、算SOD活性：</p><p>　　SOD總活性（酶單位/g鮮重）=（AO-AS）×VT/（AO×0.5×W×V1）</p><p>　　式中：AO為光照對(duì)照管的吸光度值；AS為樣品管的吸光度值；VT為樣液總體積（mL）；V1為測(cè)定時(shí)樣品用量（mL）；W為樣品的重量（g）。</p><p>　　酶液提?。喝∫呀?jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品0

30、.5g置于預(yù)冷的研缽中，加入5mL預(yù)冷的50mmol/L （pH7.8）磷酸緩沖液(分幾次加入)，在冰浴下研磨成勻漿，10000r/min下離心10min（2~4℃）。上清液即為SOD粗提液。</p><p>　　顯色反應(yīng)：取5mL玻璃管（要求透明度好）7支，3支為測(cè)定管，3支為對(duì)照管，另外1支為空白對(duì)照。按下表4加入各種溶液：</p><p>　　表4 各溶液加入量</p>

31、<p>　　混勻后取一支對(duì)照管置暗處，其他各管于4000LX日光下反應(yīng)20min（要求各管受光情況一致，溫度高時(shí)間縮短，溫度低時(shí)間延長(zhǎng)）。SOD活性測(cè)定與計(jì)算：至反應(yīng)結(jié)束后，以不照光的對(duì)照管作空白，分別測(cè)定其他各管的吸光度并進(jìn)行SOD活性計(jì)算。</p><p>　　2.2.3.2 多酚氧化酶（PPO）活性</p><p>　　多酚氧化酶是一種含銅的氧化酶，常用鄰苯二酚（兒茶酚

32、）通過(guò)比色法測(cè)量產(chǎn)物的形成，以此來(lái)測(cè)定多酚氧化酶的活力。本次測(cè)定參考蔡漢權(quán)等[10]關(guān)于橄欖材料中多酚氧化酶活力的敘述測(cè)定方法進(jìn)行。</p><p>　　PPO活力（0.01A×min-1）=A×D/（0.01×t×a）</p><p>　　式中：A為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值；D為稀釋倍數(shù)，即提取的總酶液為反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)酶液體積的倍數(shù)；t為反應(yīng)時(shí)間（mi

33、n）；W為樣品鮮重（g）。</p><p>　　酶液制備：稱取已經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品1.0g置于研缽中，加入0.5g PVP和10mL 0.1mol/L pH6.5磷酸緩沖液，研磨成勻漿，濾液加入30%飽和度硫酸銨，離心除沉淀，上清液再加硫酸銨使達(dá)60%飽和度，離心收集沉淀。將所得沉淀溶于2~3mL 0.01mol/L pH6.5磷酸緩沖液即為酶液，以上操作均在4℃下進(jìn)行。</p><p>　

34、　酶活力的測(cè)定：在試管中加入2.0mL 0.05mol/L pH5.5磷酸緩沖液，1.0mL 0.1ml/L鄰苯二酚，1.0mL酶液，迅速搖勻后于525nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值，然后倒入試管中，放入37℃恒溫水浴中保溫10min，加入2mL 20%三氯乙酸終止反應(yīng)，離心取上清。于525nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值（以上實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)平行）。</p><p>　　2.2.3.3 過(guò)氧化氫酶（CAT）活性</p>&

35、lt;p>　　過(guò)氧化氫酶是一種血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過(guò)氧化氫分解為水和分子氧，在此過(guò)程中起傳遞電子的作用，過(guò)氧化氫既是氧化劑又是還原劑。故可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測(cè)定該酶活力大小。酶活性用每g鮮重樣品1min內(nèi)OD變化值表示：</p><p>　　CAT活性（A×g-1×min-1）=A×V/（W×a×t）</p><p

36、>　　式中：A為反應(yīng)時(shí)間內(nèi)吸光度的變化值；V是提取酶液總量（mL）；a是測(cè)定時(shí)酶液用量（mL）；W為樣品鮮重（g）；t反應(yīng)時(shí)間（min）。</p><p>　　本次測(cè)定方法參考相關(guān)文獻(xiàn)[11]進(jìn)行操作。酶液提?。喝悠?.5g加入pH7.0的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿。將其轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并定容至10mL，于10000r/min下離心15min，上清液即為過(guò)氧化氫酶的粗提液，以上操作均

37、在4℃下進(jìn)行。</p><p>　　酶活性測(cè)定：取10mL試管4支，其中1支為對(duì)照管，3支為處理管，按表5順序加入試劑，其中對(duì)照管中加入的粗酶液為煮死后的酶液。</p><p>　　表5 各溶液加入量</p><p>　　25℃預(yù)熱后，逐管加入0.1mol/L H2O2 0.3mL，每加完一管立即記時(shí)，并迅速倒入石英比色皿中，240nm下測(cè)定吸光度，每隔1min讀

38、數(shù)1次，共測(cè)4min，待3支管全部測(cè)定完后，計(jì)算酶活力。將每分鐘OD值減少0.01定義為一個(gè)酶活力單位（以上實(shí)驗(yàn)均做3個(gè)平行）。</p><p>　　2.2.3.4 葉綠素含量</p><p>　　高等植物光合作用過(guò)程中利用的光能是通過(guò)葉綠體色素（光合色素）吸收的。葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。葉綠素不溶于水，溶于有機(jī)溶劑，可用多種有機(jī)溶劑，如丙酮、乙醇或二甲基亞砜

39、等研磨提取或浸泡提取。葉綠色素在特定提取溶液中對(duì)特定波長(zhǎng)的光有最大吸收峰，用分光光度計(jì)測(cè)定在該波長(zhǎng)下葉綠素溶液的吸光度（也稱為光密度），再根據(jù)葉綠素在該波長(zhǎng)下的吸收系數(shù)即可計(jì)算葉綠素含量。</p><p>　　將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=12.7A663-2.69A645</p><p>　　Cb=22.9A645-4.68A663</p><p>　　

40、據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為總?cè)~綠素的濃度。最后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量：葉綠素的含量（mg/g）=（葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重（或干重）。</p><p>　　操作步驟按文獻(xiàn)[12]進(jìn)行。葉綠素提?。悍Q取已經(jīng)過(guò)預(yù)處理的樣品0.5g放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及5mL純丙酮，研磨成均漿，再加80%丙酮5mL

41、，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用適量80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心后棄沉淀，上清液用80%的丙酮定容至25mL。</p><p>　　測(cè)定光密度：取葉綠體色素提取液1mL，加80%丙酮4mL稀釋后轉(zhuǎn)入比色皿中，以80%丙酮為對(duì)照，分別測(cè)定波長(zhǎng)663nm、645nm下測(cè)定吸光度并進(jìn)行計(jì)算。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p>&l

42、t;p>　　3.1 不同覆膜處理對(duì)葡萄物候期的影響</p><p>　　本試驗(yàn)進(jìn)行了不同覆膜處理對(duì)夏黑和甬優(yōu)一號(hào)主要物候期影響的觀測(cè)，結(jié)果如表6所示。由表6可見(jiàn)，無(wú)論是夏黑品種還是甬優(yōu)1號(hào)品種，雙層膜處理下的各個(gè)主要物候期指標(biāo)均早于單層膜處理，其中夏黑品種雙層膜處理的成熟期比單層膜處理相同處理早17d，甬優(yōu)一號(hào)則提早14d。由此表明，雙層膜處理可使葡萄品種提前成熟，這與雙層膜條件下的光溫變化有關(guān)。</

43、p><p>　　表6 雙層膜栽培對(duì)葡萄主要物候期的影響</p><p>　　3.2 雙層膜處理對(duì)葡萄葉片超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響 </p><p>　　超氧化物歧化酶（SOD）是活性氧清除系統(tǒng)中最重要的抗氧化酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷過(guò)程中具有十分重要的作用[13-14]。SOD能催化氧自由基的歧化反應(yīng)，生成H2O2和

44、O2，H2O2在過(guò)氧化物酶（POD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為水而得以清除[15-16]。因此，SOD在機(jī)體內(nèi)實(shí)為氧自由基的消除劑，能消除負(fù)1價(jià)自由基對(duì)生物體的毒害，是生物體抗氧化脅迫的關(guān)鍵酶類，其活性決定了O2和H2O2的濃度。</p><p>　　本試驗(yàn)對(duì)雙層膜處理對(duì)葡萄葉片超氧化物歧化酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。由圖1和圖2可見(jiàn)，雙層膜對(duì)葡萄葉片SOD活性影響較大，無(wú)

45、論是夏黑還是甬優(yōu)1號(hào)，SOD活性在雙層膜設(shè)施條件下高于單層膜，且隨著葡萄漿果的不斷成熟都逐漸升高。由結(jié)果還可看出，夏黑品種雙層膜處理8月份的SOD活性明顯低于7月份，這與前面的物候期觀察結(jié)果是一致的。夏黑雙層膜在7月份就已成熟。而甬優(yōu)1號(hào)則在8月份成熟。</p><p>　　圖1 雙單層膜對(duì)夏黑葉片SOD值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜

46、處理。</p><p>　　圖2 雙單層膜對(duì)甬優(yōu)一號(hào)葉片SOD值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　3.3 雙層膜處理對(duì)葡萄葉多酚氧化酶（PPO）活性的影響</p><p>　　植物組織酶促褐變是由于多酚氧化酶（PPO）與酚類物質(zhì)的區(qū)域化分布被打破，PPO催化酚類物質(zhì)

47、氧化、聚合所引起[17-18]。PPO分布于細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)體、線粒體等細(xì)胞器中，而酚類物質(zhì)存在于液泡中，在正常條件下，由于PPO和褐變底物（酚類物質(zhì)）在細(xì)胞中區(qū)域化的分布，果實(shí)不會(huì)發(fā)生褐變。逆境或衰老等因素會(huì)刺激活性氧增加，損傷細(xì)胞結(jié)構(gòu)，打破PPO與酚類物質(zhì)的區(qū)室化分布，引起果實(shí)褐變[19]。</p><p>　　本試驗(yàn)對(duì)不同產(chǎn)地和不同品種對(duì)葡萄葉的多酚氧化酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖3和圖4。由圖3和圖4可

48、見(jiàn)，雙層膜對(duì)葡萄葉片PPO活性影響較大，無(wú)論是夏黑還是甬優(yōu)1號(hào)，PPO活性在雙層膜設(shè)施條件下高于單層膜，且隨著葡萄漿果的不斷成熟都逐漸升高。由結(jié)果還可看出，夏黑品種雙層膜處理8月份的PPO活性明顯低于7月份，這與前面的物候期觀察結(jié)果是一致的。夏黑雙層膜在7月份就已成熟。而甬優(yōu)1號(hào)則在8月份成熟。</p><p>　　圖3 雙單層膜對(duì)夏黑葉片PPO值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線

49、處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　圖4 雙單層膜對(duì)甬優(yōu)一號(hào)葉片PPO值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　3.4 雙層膜處理對(duì)葡萄葉過(guò)氧化氫酶（CAT）活性的影響</p><p>　　過(guò)氧化氫酶（CAT）是生物體內(nèi)主要的抗氧化酶之一

50、。其功能是催化細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫的分解，從而使細(xì)胞免于遭受過(guò)氧化氫的毒害。幾乎所有的生物體都存在過(guò)氧化氫酶，可以反映某一時(shí)期植物體內(nèi)代謝的變化。在植物中過(guò)氧化氫酶主要清除光呼吸、線粒體電子傳遞以及脂肪酸β-氧化等過(guò)程中產(chǎn)生的H2O2[20-21]。</p><p>　　本試驗(yàn)對(duì)不同品種和不同產(chǎn)地對(duì)葡萄葉片的過(guò)氧化氫酶活性變化進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖5和圖6。由圖5和圖6可見(jiàn)，雙層膜對(duì)葡萄葉片CAT活性影響很大，無(wú)論是夏黑

51、還是甬優(yōu)一號(hào)，CAT活性在雙層膜設(shè)施條件下高于單層膜，且隨著葡萄漿果的不斷成熟都逐漸升高。</p><p>　　圖5 雙單層膜對(duì)夏黑葉片CAT值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　圖6 雙單層膜對(duì)甬優(yōu)一號(hào)葉片CAT值的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單

52、層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　3.5 雙層膜處理對(duì)葉綠素含量的影響</p><p>　　葉片葉綠素含量與光合作用密切相關(guān)，是反眏葉片生理狀態(tài)的重要指標(biāo)。在植物光合生理、發(fā)育生理和抗性生理研究中經(jīng)常需要測(cè)定葉綠素含量[22]。葉綠素含量也是指導(dǎo)作物栽培生產(chǎn)和選育作物品種的重要指標(biāo)。</p><p>　　本試驗(yàn)采用分光光度法對(duì)不同產(chǎn)地和不同

53、品種對(duì)的葡萄葉葉綠素含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖7和圖8。由圖7和圖8可見(jiàn)，雙層膜對(duì)葡萄葉片葉綠素的影響較大，雙層膜處理使夏黑和甬優(yōu)一號(hào)葡萄葉片葉綠素a和葉綠素b含量增加，且隨著葡萄的成熟期不斷增加。由圖7還可看出，夏黑品種雙層膜處理8月份的葉綠素含量明顯低于7月份，這與前面的物候期觀察結(jié)果是一致的。夏黑雙層膜在7月份就已成熟。而甬優(yōu)一號(hào)則在8月份成熟。</p><p>　　圖7 雙單層膜對(duì)夏黑葉片葉綠素含量的影響&

54、lt;/p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p>　　圖8 雙單層膜對(duì)甬優(yōu)一號(hào)葉片葉綠素含量的影響</p><p>　　注：圖中藍(lán)色線處理I為單層膜處理；紅色線處理II為雙層膜處理。</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　

55、　超氧化物歧化酶（SOD）與過(guò)氧化氫酶（CAT）在生物體內(nèi)都具有非常重要的生理功能。它們都是是活性氧清除系統(tǒng)中最重要的抗氧化酶，在保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷過(guò)程中具有十分重要的作用[23]。SOD與CAT等一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶促反應(yīng)防御體系，從而維護(hù)生物體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化反應(yīng)。多酚氧化酶（PPO）是植物體中的保護(hù)酶，它們的強(qiáng)弱直接關(guān)系到植株抵御病害的能力，它們的活性越大其抗病性越強(qiáng)；反之，活性越小，植株的抗病性越弱[15]。在

56、植物生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，這兩種酶的活性不斷發(fā)生變化。PPO是含銅的酶，在正常的情況下，PPO和底物在細(xì)胞質(zhì)中是分開(kāi)的。當(dāng)細(xì)胞受輕微破壞組織衰老時(shí)，有些細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體時(shí)，多酚氧化酶和底物接觸，發(fā)生反應(yīng)，將酚氧化為棕褐色的醌。醌對(duì)微生物有毒，可防止植物感染。葉綠素是反映葉片生理狀態(tài)的重要指標(biāo)，其含量也是指導(dǎo)作物栽培生產(chǎn)和選育作物品種的重要指標(biāo)。</p><p>　　本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，夏黑和甬優(yōu)1號(hào)葉片中SOD、PPO和CAT

57、活性都是雙層膜設(shè)施條件下高于單層膜，且隨著葡萄漿果的不斷成熟都逐漸升高。由此表明雙層膜條件下的光照脅迫對(duì)以上三種抗氧化酶活性有較大的促進(jìn)作用。本研究結(jié)果還表明，雙層膜處理使夏黑和甬優(yōu)1號(hào)葡萄葉片葉綠素a和葉綠素b含量增加，葉綠素a/b值下降。在光照脅迫下，葡萄植株葉片通過(guò)增加葉綠素含量來(lái)盡可能捕捉光能。當(dāng)植物在光照強(qiáng)度不斷減弱的條件下，可通過(guò)提高葉綠素及類胡蘿卜素的含量來(lái)捕捉光能，從而增強(qiáng)植物對(duì)光的吸收利用，保證植物在逆境下的正常生長(zhǎng)[

58、24]。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 郝建軍,康宗利.植物生理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2006,12:68-72.</p><p>　　[2] 楊興有,劉國(guó)順.光強(qiáng)對(duì)煙草幼苗形態(tài)和生理指標(biāo)的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2007,18(11): 2643-2644.</p>

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