粳稻云引受稻瘟病菌誘導(dǎo)后逆境相關(guān)候選基因的克隆及轉(zhuǎn)化.pdf

1、基因芯片作為一種高端的生物信息學(xué)技術(shù)，在分子生物學(xué)、基因組學(xué)、蛋白組學(xué)等方面發(fā)揮著巨大的作用，該技術(shù)自1995年問世以來，就廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)譜分析、新基因的發(fā)掘、功能基因組研究等領(lǐng)域。
　　 本研究在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建好的粳稻云引受稻瘟病誘導(dǎo)表達(dá)的基因芯片的基礎(chǔ)上，主要得到以下結(jié)果：
　　 (1)以粳稻云引和其離子束誘變材料4048(稻瘟病感病)為實(shí)驗(yàn)材料，選擇基因表達(dá)芯片中對(duì)稻瘟病菌誘導(dǎo)作出響應(yīng)的顯著相關(guān)的候選基因CB6

2、52033和AK065873進(jìn)行克隆，并通過RACE技術(shù)得到了EST CB652033的cDNA全長(zhǎng)。
　　 (2)測(cè)序表明，云引和4048中CB652033的同源性為95.6[％]，但有幾個(gè)堿基的缺失，而AK065873在云引和4048之間的差異甚大，其同源性僅為87.3[％]，誘變材料中缺失一段長(zhǎng)達(dá)102bp的序列，預(yù)測(cè)該基因可能是云引抗病而4048感病的一個(gè)原因。
　　 (3)通過對(duì)NCBI中GeneBank檢索發(fā)

3、現(xiàn)，CB652033與磷酸核酮糖激酶和磷酸戊糖激酶的活性相關(guān)，這兩種酶在糖代謝中起到重要的作用，因而推測(cè)此基因可能參與磷酸核酮糖和磷酸戊糖的代謝活動(dòng)。AK065873為一種bzip轉(zhuǎn)錄因子，其功能與ABI5類似。
　　 (4)通過與NCBI中GeneBank比對(duì)，下載比對(duì)序列，運(yùn)用MEGA4構(gòu)建了兩基因的遺傳進(jìn)化樹。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CB652033在水稻中有5個(gè)同源性近90[％]的序列，而與NM-001054360的同源性達(dá)到99[％

4、]，推測(cè)其就是NM-001054360的一個(gè)EST。AK065873與水稻中ABI5的編碼基因NM-001069897的同源性達(dá)到95.89[％],與玉米中編碼ABI5的基因EU961169的同源性有84.35[％]，與小麥中編碼ABI5的AY150675的同源性達(dá)到85.42[％]。
　　 (5)熒光定量PCR表明，CB652033在接種12h時(shí)表達(dá)最上調(diào)，隨著時(shí)間的推移又逐漸下調(diào)，與基因表達(dá)芯片數(shù)據(jù)大致吻合，說明該基因在遇到

5、病原菌侵襲時(shí)起到了一定的防御作用，而后續(xù)的表達(dá)下調(diào)則可能是該基因的防御不足以抵擋病害的侵襲，因此一直受到抑制。AK065873基因在稻瘟病菌接種12h時(shí)表達(dá)最上調(diào)，隨后隨著時(shí)間的推移，一直下調(diào)表達(dá)，直到96h時(shí)又上調(diào)表達(dá)，結(jié)合bzip轉(zhuǎn)錄因子的特性及其表達(dá)特性，推測(cè)該基因在病蟲害侵襲時(shí)會(huì)產(chǎn)生抗性反應(yīng)，在病害侵襲方面有一定的抵抗功能。
　　 (6)以pBI121為空載體，分別在擴(kuò)增兩個(gè)基因的引物兩端加入酶切位點(diǎn)，構(gòu)建了該兩個(gè)基因的