pXAIS的安全性及對獼猴內(nèi)分泌影響的研究.pdf

1、pXAIS是由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的一種用于提高動(dòng)物繁殖能力的抑制素基因疫苗，通過平衡致死系統(tǒng)減毒沙門氏菌C500所呈遞的一種核酸疫苗。本試驗(yàn)應(yīng)用分子克隆、基因免疫、酶聯(lián)免疫測定、放射免疫等生物技術(shù)來研究pXAIS對獼猴抗抑制素抗體產(chǎn)生規(guī)律、繁殖及生殖內(nèi)分泌的影響，并從環(huán)境和動(dòng)物組織器官病理學(xué)變化等方面來評價(jià)該疫苗免疫的安全性，探索最佳抑制素基因免疫方案，為提高獼猴繁殖性能，改善國內(nèi)動(dòng)物園獼猴性別比嚴(yán)

2、重失調(diào)提供實(shí)踐指導(dǎo)，同時(shí)對生物醫(yī)學(xué)、行為組織學(xué)等領(lǐng)域的臨床應(yīng)用也具有一定的理論參考意義。本研究的主要內(nèi)容如下:
　　 1、獼猴對pXAIS的免疫反應(yīng)性研究
　　 為分析獼猴對抑制素基因免疫的免疫反應(yīng)性及影響因素，本研究采用不同劑量的卵泡抑制素融合質(zhì)粒pXAIS兩次免疫獼猴。結(jié)果發(fā)現(xiàn):首次免疫期間整個(gè)免疫組的抗體水平均顯著高于對照組(P＜0.05)，但三個(gè)處理組之間差異不顯著(P＞0.05);首免后14d，試驗(yàn)組獼猴血清中

3、抗體水平均呈下降趨勢，但仍高于對照組;加強(qiáng)免疫后，各處理組抗體滴度均顯著高于首次免疫(P＜0.05)，在整個(gè)抗體水平監(jiān)控過程中，加免后7-10d內(nèi)，加強(qiáng)免疫后第7d，獼猴血清中產(chǎn)生抗抑制素抗體水平最高，第14d最低，中間則則略有下降。研究結(jié)果表明，pXAIS疫苗免疫獼猴后，能激活獼猴的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抑制素抗體，對獼猴具有良好的抗原性，通過加強(qiáng)免疫可以提高獼猴體內(nèi)的抗體水平，并能長期持續(xù)表達(dá)。
　　 2.pXAIS免疫對獼猴繁殖及生

4、殖內(nèi)分泌的影響
　　 為探討pXAIS疫苗免疫對獼猴繁殖及生殖內(nèi)分泌的作用，本試驗(yàn)采用不同劑量（0.2×1010CFU/只、0.6×1010CFU/只、1.0×1010CFU/只）的抑制素融合質(zhì)粒pXAIS兩次免疫獼猴。結(jié)果表明:各試驗(yàn)組獼猴雖然沒有出現(xiàn)雙胎或多胎，但與對照組相比，疫苗處理組獼猴發(fā)情時(shí)間早且集中，成功實(shí)現(xiàn)了高發(fā)情率、高妊娠率、高成活率，其中，1.0×1010CFU/只組三只雌性獼猴全部受孕、分娩，且母子均健康，而

5、對照組發(fā)情率僅為33.33％(1/3)。兩次免疫中，試驗(yàn)處理組E2水平均高于對照組，但差異不顯著(P＞0.05);加強(qiáng)免疫后7d和14d，0.6×1010CFU/只免疫組E2顯著高于對照組和1.0×1010CFU/只組，與0.2×1010CFU/只組則差異不顯著;試驗(yàn)組0.6×1010CFU/只和1.0×1010CFU/只兩組P濃度均極顯著高于對照組和0.2×1010CFU/只組(P＜0.01)，而0.2×1010CFU/只組與對照組之

6、間差異不顯著。與首免后檢測點(diǎn)相比，加強(qiáng)免疫后試驗(yàn)組E2、P水平均顯著提高;從整個(gè)生殖激素水平的監(jiān)控過程來看，加強(qiáng)免疫后7d，E2、P水平上升最快。研究結(jié)果表明，pXAIS免疫產(chǎn)生的抑制素抗體可中和內(nèi)源性抑制素，促進(jìn)多個(gè)卵泡的發(fā)育排卵，進(jìn)而使黃體細(xì)胞分泌P，對靈長類獼猴E2、P的變化也有一定的促進(jìn)作用，且作用大小與免疫次數(shù)和免疫劑量有密切關(guān)系。經(jīng)對各免疫組獼猴內(nèi)分泌激素的測定發(fā)現(xiàn)，0.6×1010CFU/只免疫組效果最佳。此外，抑制素基因

7、疫苗pXAIS免疫獼猴可以誘導(dǎo)獼猴提前發(fā)情，增強(qiáng)妊娠體質(zhì)，對改善獼猴繁殖性能及嬰幼猴的生長發(fā)育有積極作用。
　　 3.pXAIS免疫獼猴的安全性
　　 為評價(jià)pXAIS免疫的安全性，本研究分別以家兔和獼猴為動(dòng)物模型，用卵泡抑制素融合質(zhì)粒pXAIS進(jìn)行兩次免疫，并于試驗(yàn)過程中對其進(jìn)行臨床觀察、檢測家兔組織器官的病理學(xué)變化以及獼猴排泄物（糞尿混合物）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)期間，各試驗(yàn)組與對照組相比，動(dòng)物生長狀態(tài)、采食、繁殖狀況及糞