毒死蜱降解菌株Sphingopyxis terrae R17的分離鑒定及其luxAB基因標(biāo)記研究.pdf

1、1．采用搖瓶富集法和土壤富集法，對(duì)農(nóng)藥廠排污溝污泥和土壤進(jìn)行馴化培養(yǎng)，從中分離得到24株菌，其中有6株菌對(duì)毒死蜱的降解效果較好，命名為E30、R17、P5、B1、Z5、T15，在48h對(duì)10mg·L-1毒死蜱的降解效率分別達(dá)55.47％、32.27％、58.15％。34.76％、27.10％、42.01％。
　　 2．采用三親本結(jié)合法將發(fā)光酶基因luxAB成功導(dǎo)入R17菌株得到標(biāo)記菌株LuxR17，在暗室里可以觀察到明顯的熒光現(xiàn)

2、象，連續(xù)轉(zhuǎn)代20次均無(wú)質(zhì)粒丟失現(xiàn)象。
　　 3．對(duì)R17菌株進(jìn)行生理生化和16S rDNA序列同源性分析，發(fā)現(xiàn)該菌株能以毒死蜱為唯一碳源進(jìn)行生長(zhǎng)，鑒定為Sphingopyxis terrae。
　　 4．R17、LuxR17菌株的最適生長(zhǎng)溫度為35℃、最適pH為7～8。在此條件下R17培養(yǎng)28h后到達(dá)穩(wěn)定期，菌落濃度達(dá)9.18×108cfu·mL-1。LuxR17菌株培養(yǎng)32h達(dá)穩(wěn)定期，菌落濃度達(dá)1.04×109cfu·

3、mL-1。
　　 5．R17、LuxR17菌株在不同時(shí)間對(duì)10mg·L-1毒死蜱的降解特性研究結(jié)果表明，在1d、2d、3d和4d內(nèi)，當(dāng)R17菌株的接種量為9.18×107cfu·mL-1時(shí)，毒死蜱降解率分別達(dá)到18.59％、31.23％、36.55％和47.69％;LuxR17菌株的接種量為1.04×108cfu·mL-1時(shí)，毒死蜱的降解效率分別為17.72％、24.14％、35.06％和48.48％。
　　 6．R17

4、、LuxR17菌株對(duì)不同濃度毒死蜱的降解特性研究結(jié)果表明，對(duì)1mg·L-1、5mg·L-1和10mg·L-1的毒死蜱降解2d，R17對(duì)毒死蜱的降解率分別達(dá)到50.21％、43.46％和31.23％;LuxR17菌株對(duì)毒死蜱的降解效率分別為41.64％、35.20％和24.14％。
　　 7．LuxR17菌株在自然土壤中和滅菌土壤中的存活狀況研究結(jié)果表明，LuxR17菌株在土壤中的變化總的來(lái)說(shuō)呈下降趨勢(shì)，但在不同處理土壤中其下降的

5、速度有所不同；在滅菌土壤中LuxR17的活菌數(shù)要比自然土壤中的多，在加有毒死蜱的土壤中LuxR17的活菌數(shù)要高于未加毒死蜱的土壤。
　　 8．毒死蜱在不同處理土壤中的降解動(dòng)態(tài)研究結(jié)果表明，自然土壤中毒死蜱的降解速率較滅菌土壤中的快，在加LuxR17菌液的土壤中毒死蜱的降解速率要顯著高于未加LuxR17菌液的土壤。將LuxR17加入含20mg·L-1毒死蜱的滅菌土壤和自然土壤中降解3、6、9、12d后，滅菌土壤中毒死蜱的降解率分別