煙草內(nèi)生真菌種群多樣性及煙草赤星病生防內(nèi)生菌的篩選.pdf

1、本研究從2007年到2008年以河南省9個(gè)田間種植的煙草品種（長(zhǎng)脖黃、凈葉黃、金星6007、G28、中煙100、中煙101、NC89、K326、6614）的根、莖、葉為試驗(yàn)材料，通過兩年的重復(fù)實(shí)驗(yàn)對(duì)9個(gè)品種不同生育期中煙草內(nèi)生真菌的多樣性及其動(dòng)態(tài)分布規(guī)律進(jìn)行了研究，明確了我省煙草內(nèi)生真菌的組成及分布規(guī)律，建立了煙草內(nèi)生菌資源庫(kù)。并用獲得的內(nèi)生菌對(duì)煙草赤星病病原進(jìn)行室內(nèi)拮抗活性測(cè)定。篩選出了對(duì)煙草赤星病菌有較好拮抗活性的菌株，為煙草赤星病

2、菌生物防治研究奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)研究了煙草赤星病病菌和內(nèi)生鏈格孢菌之間的關(guān)系。 具體結(jié)果如下： 1.內(nèi)生真菌多樣性：對(duì)獲得的977個(gè)菌株在人工培養(yǎng)條件下進(jìn)行促進(jìn)產(chǎn)孢和形態(tài)鑒定，有943株菌株產(chǎn)孢，占總菌株的96.52％，分屬于15個(gè)屬，分別是：鏈格孢屬（Alternaria Nees）毛殼菌屬（Chaetomium Kunze et Fr.）、青霉菌屬（Penicilium Link：Fr.）、鐮孢菌屬（FusariumL

3、ink.Fr.）、木霉菌屬（Trichotderma Pers.）、曲霉菌屬（Aspergillus P.Micheli ex Link：Fr.）、黑孢菌屬（Nigrospora Zim.）、炭疽菌屬（Colletotrichum Gorda）、莖點(diǎn)霉屬（Phoma Sacc.）、平臍蠕孢屬（Bipolaris Shoemaker）、單端孢屬（Trichothecium Link）、凸臍蠕孢屬（Exserohilum K.J.Lenoa

4、dSuggs）、擬盤多毛孢屬（Pestalotiopsis Steyaert）、彎孢屬（Curvularia Boedijn）和黑痣菌屬（Phyllachora Nitschke ex Fuckle）。準(zhǔn)確鑒定到種的內(nèi)生真菌有23種，鏈格孢[Alternariaalternate（Fr.：Fr.）Keissler]、甘薯生鏈格孢[Alternaria bataticola（I.kata）Yamamoto]、鄭州鏈格孢（Alternari

5、azhengzhouensis T.Y. Zhang）、繩生毛殼（Chaetomium unicola Cooke）、琥珀色毛殼（Chaetomium succineum L.M. Ames）、賴氏毛殼（Chaetomium raii G.Malhotra&Mukerji）、金色毛殼（Chaetomium aureum Chives）、旋絲毛殼（Chaetominum bostrychodes Zopf）、指狀青霉[Penicilium

6、 digitatum（Pers.：Fr.）Sacc.]、串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme Sheldon）、蕉斑鐮刀菌（Fusarium stoveri Booth）、長(zhǎng)枝木霉（Trichoderma longibrachiatum Rifai：）、黑曲霉（Aspergillus.niger Tiegh.）、煙曲霉（Aspergillus. fumigatus Fresen.）、球黑孢[Nigrospora spha

7、erica（Sacc.）Mason]、膠孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides（Penzig）Penzig et Saccardo.]、附球莖點(diǎn)霉（Phoma epicoccina Punithalingam）、麥根腐平臍蠕孢[Bipolaris sorokiniana（Sacc.）Shoemaker]、嘴突凸臍蠕孢[Exserohilum rostratum（Drechler）Leonard&Suggs

8、.]、粉紅單端孢菌[Trichotheciumroseum（Pers：）Link：]、煙草擬盤多毛孢（Pestalotiopsis nicotiae W.Han）、新月彎孢[Curvularialunata（Wakker）Boedijn]、煙草黑痣菌（Phyllachora nicotiae W， Han）。其中鏈格孢屬（AlternariaNees）和毛殼屬（Chaetomium Kunze）是煙草內(nèi)生真菌的優(yōu)勢(shì)屬，分別占分離總菌株的

9、22.42％和16.27％。在977株菌株中有34株菌株未產(chǎn)孢，占總菌株的3.48％。 2.9個(gè)煙草品種整個(gè)生育期中內(nèi)生真菌種群動(dòng)態(tài)：從苗期到成熟期，煙草中的內(nèi)生真菌種類出現(xiàn)率和分離數(shù)的規(guī)律均為：苗期<團(tuán)棵期<旺長(zhǎng)期<成熟期。從團(tuán)棵期內(nèi)生真菌數(shù)量和種類都開始顯著增加。整個(gè)生育期中所檢測(cè)到的菌群在旺長(zhǎng)期和成熟期全部出現(xiàn)。隨著栽培時(shí)間的延長(zhǎng)，煙草內(nèi)生真菌的種類和數(shù)量呈遞增趨勢(shì)。 3.煙草不同器官中內(nèi)生真菌種群動(dòng)態(tài)：從煙草的根

10、、莖、葉中分離得到的977株內(nèi)生真菌，葉帶菌量最多，莖次之，根最少；所分離到的菌群也是葉最多，莖次之，根最少；其中根部174株涉及7個(gè)屬，莖部365株涉及11個(gè)屬，葉部438株涉及14個(gè)屬。結(jié)果表明，煙草的不同部位內(nèi)生真菌的數(shù)量、分布和種群存有差異。 4.煙草內(nèi)生真菌年際變動(dòng)趨勢(shì)：對(duì)2007年和2008年分離出的煙草內(nèi)生真菌進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢(shì)種屬比較穩(wěn)定，在07、08年都能檢測(cè)到，這表現(xiàn)出了內(nèi)生菌優(yōu)勢(shì)種穩(wěn)定的一面。個(gè)別菌群年際出

11、現(xiàn)率不同。結(jié)果表明煙草內(nèi)生真菌在水平年際間存在差別，具有隨時(shí)間有變動(dòng)的趨勢(shì)。 5.內(nèi)生菌拮抗活性：拮抗結(jié)果表明，分離獲得的內(nèi)生菌菌株對(duì)病原菌均有不同程度的抑制作用。從煙草分離到的977株內(nèi)生真菌、329株內(nèi)生細(xì)菌、11株內(nèi)生放線菌中，篩選出了對(duì)煙草赤星病菌有較好拮抗活性的內(nèi)生真菌2株，內(nèi)生細(xì)菌4株，內(nèi)生放線菌1株，它們的抑菌率均可達(dá)到70％以上。接種實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明這7株內(nèi)生菌對(duì)煙草均無(wú)致病性，初步確定其在生防應(yīng)用方面是安全的。

12、 6.內(nèi)生菌潛在致病性研究：通過形態(tài)比較鑒定煙草內(nèi)生菌優(yōu)勢(shì)種鏈格孢和從煙草赤星病病斑上分離到的病原鏈格孢菌株是同一個(gè)種。通過對(duì)煙草內(nèi)生鏈格孢菌的致病性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)部分內(nèi)生鏈格孢菌不引起明顯的癥狀，部分內(nèi)生菌可引起不同程度的病交。接種試驗(yàn)結(jié)果表明，部分內(nèi)生鏈格孢菌在人工接種條件下有明顯致病能力或潛在致病性，初步確定煙草赤星病菌在煙草體內(nèi)具有長(zhǎng)期潛伏的特性，當(dāng)環(huán)境條件適宜和寄主易感病時(shí)才表現(xiàn)出病害癥狀，該結(jié)果對(duì)于煙草赤星病的防治具有重要的