油菜內(nèi)生真菌的多樣性及生防潛力評(píng)估.pdf

1、植物內(nèi)生真菌有著存在的普遍性和豐富的多樣性，同時(shí)有著多樣的生態(tài)學(xué)作用，包括促進(jìn)植物生長(zhǎng)、增強(qiáng)植物的免疫性等。油菜是我國(guó)的重要油料作物，對(duì)于油菜體內(nèi)的真菌和細(xì)菌類群及其防治病害的作用缺乏系統(tǒng)研究。鑒此，我們開展了油菜內(nèi)生真菌的多樣性分析，并對(duì)其防治植物真菌病害的潛力進(jìn)行了研究。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1.利用組織分離法分離純化并鑒定了油菜內(nèi)生真菌的種類，分析油菜的不同營(yíng)養(yǎng)器官（根、莖、葉）中內(nèi)生真菌的分布，不同生育期內(nèi)生真菌的

2、種類。利用數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)分析的方法，計(jì)算了油菜內(nèi)生真菌根莖葉不同部位以及整體的香農(nóng)指數(shù)和辛普森指數(shù)。共獲得97株油菜內(nèi)生真菌，鑒定為24個(gè)目40個(gè)種，其中子囊菌是最多，占總數(shù)的84.6％。根、莖、葉中菌株的數(shù)量分別是35株，49株和13株。根莖葉不同部位的辛普森指數(shù)分別為0.936、0.962和0.731。綜合油菜各部位來源的內(nèi)生真菌的辛普森指數(shù)為0.959，表明油菜內(nèi)生真菌存在著豐富的多樣性。在所分離和鑒定的內(nèi)生真菌中，Alternaria

3、alternata和Chaetomiumglobosum在油菜根、莖、葉中都有分布;5種真菌（Macrophominasp.、Aspergillusversicolor、Penicilliumpinophilum、Fusariumtricinctum和Fusariumoxysporum）只存在于根部。
　　2.平板拮抗篩選試驗(yàn)表明:24株內(nèi)生真菌能夠抑制核盤菌生長(zhǎng)的菌株，形成寬度為3～17mm的抑菌帶，這些菌株屬于鏈格孢屬（Alt

4、ernariasp）、曲霉屬(Aspergillus)、毛殼菌屬（Chaetomium）、粘帚霉屬（Clonostachys）、Dothidea、附球菌屬(Epicoccum)、鐮刀菌屬（Fusarium）、Leptosphaeria和Simplicillium。其中的4株真菌，即A.flavipesCanS-34A、C.globosumCanS-73、C.roseaCanS-43和L.biglobosaCanS-51的代謝產(chǎn)物在油菜葉

5、片上表現(xiàn)出穩(wěn)定的抑制核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）侵染的效果。此外，還篩選出6株真菌產(chǎn)生揮發(fā)性抗真菌物質(zhì)。
　　3.發(fā)現(xiàn)35株內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生吲哚乙酸(IAA)，包括鏈格孢（Alternaria）、曲霉屬（Aspergillus）、短梗霉屬(Aureobasidium)、毛殼菌屬（Chaetomium）、附球菌屬(Epicoccum)、鐮刀菌屬（Fusarium）、香灰菌屬（Hypoxylon）、Macr

6、ophomina、黑孢菌屬（Nigrospora）、Periconia、莖點(diǎn)霉屬（Phoma）和鎖擲孢酵母（Sporidiobolus）。其中的3株真菌對(duì)油菜的側(cè)根數(shù)量有明顯的促進(jìn)作用，它們是FusariumproliferatumCanR-9和兩株酵母鎖擲孢酵母（Sporidiobolussp.）CanS-62和DioszegiazsoltiiCanS-69。通過兩年的盆栽試驗(yàn)證明:A.alternata菌株CanL-18和F.tri

7、cinctum菌株CanR-70及CanR-71r顯示出促進(jìn)油菜生長(zhǎng)的效果。
　　4.發(fā)現(xiàn)A.flavipesCanS-34A產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可以抑制11個(gè)屬15個(gè)種（亞種）的植物病原菌，尤其對(duì)核盤菌（S.sclerotiorum）及其近緣種（S.trifoliorum，S.minor和S.nivalis）抑制率(74.9％～100％)顯著高于對(duì)其它植物病原真菌的抑制率(13.9％～71.9％)。試驗(yàn)還證明CanS-34A產(chǎn)生的抗真

8、菌物質(zhì)可以耐80℃以下的溫度處理。采用飽和硫酸銨不能鹽析出CanS-34A產(chǎn)生的抗生物質(zhì)。
　　5.發(fā)現(xiàn)FusariumoxysporumCanR-46產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)(Volatileorganiccompounds，VOCs)，這種混合物能夠抑制多種植物病原真菌的生長(zhǎng)。GC-MS鑒定出19種VOCs，其中的5-Hexenoicacid、（±）-Limonene、3，4-2H-dihydropyran和Octanoicacid等成

9、分具有抑制病原真菌生長(zhǎng)的作用。發(fā)現(xiàn)CanR-46產(chǎn)生的VOCs抑制包括灰葡萄孢霉和大麗輪枝菌在內(nèi)的16種植物病原菌的生長(zhǎng)，延遲灰葡萄孢霉和大麗輪枝菌分生孢子萌發(fā)，抑制萌發(fā)后芽管的伸長(zhǎng)。掃描電鏡觀察，VOCs可以破壞灰葡萄孢和大麗輪枝菌菌絲的完整性，導(dǎo)致菌絲干癟。CanR-46產(chǎn)生VOCs可以在密閉條件下有效防治番茄果實(shí)灰霉病。通過與大麗輪枝菌分生孢子混合接種，CanR-46可以有效防治棉花黃萎病，并能夠在棉花根部定殖。
　　上述研