彭州地區(qū)部分牡丹品種的遺傳多樣性及親緣關(guān)系的RAPD研究.pdf

1、牡丹在長(zhǎng)期的進(jìn)化和栽培歷史中，由于本身的變異、自然雜交、栽培環(huán)境不同等形成了不同的品種類型，使得牡丹的分類鑒定難度加大。本試驗(yàn)以彭州地區(qū)種植的部分栽培品種為材料，應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)39個(gè)牡丹品種的遺傳多樣性進(jìn)行了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)研究，通過(guò)NTSYSpc(2.10版)軟件對(duì)RAPD的擴(kuò)增譜帶進(jìn)行分析，進(jìn)行牡丹品種的分子鑒定，探討牡丹品種之間的親緣關(guān)系。其主要的試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (1)采用改進(jìn)的CATB

2、法提取牡丹幼嫩葉片的DNA，分別對(duì)其進(jìn)行紫外吸收檢測(cè)、電泳檢測(cè)和RAPD檢測(cè)，結(jié)果表明：DNA完整性好，RAPD擴(kuò)增帶清晰，A260/A280的值在1.8～2.0之間，滿足RAPD反應(yīng)的要求。
　　 (2)通過(guò)對(duì)模板DNA、引物、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+濃度的優(yōu)化試驗(yàn)及對(duì)PCR反應(yīng)程序的篩選，確定了本研究的適宜反應(yīng)體系和反應(yīng)程序。反應(yīng)體系：模板DNA1μL(20ng/μL)，10×PCR緩沖液2μL，隨機(jī)引物0.8

3、μL(2.5μmol/L)、dNTPs0.8μL(2.5mmol/μL)、MgCl21.6μL(25mmol/L),Taq-DNA聚合酶0.25μL(5U/μL),雙蒸水13.55μL，總反應(yīng)體系20μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸1.5min，共40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min，4℃保存。
　　 (3)利用對(duì)100個(gè)引物進(jìn)行篩選所得到的8個(gè)引物對(duì)39個(gè)牡丹樣品進(jìn)行R

4、APD分析，共檢測(cè)到139個(gè)位點(diǎn)，其中118個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)百分率達(dá)到84.89％。平均每個(gè)引物獲得17.38個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn)，其中具有多態(tài)性的位點(diǎn)為14.75個(gè)。各品種間多態(tài)位點(diǎn)百分率變化范圍為79.36～88.19％，其中多態(tài)位點(diǎn)百分比最高的是引物S30，最低的是引物S85。
　　 (4)利用RAPD技術(shù)對(duì)39份牡丹材料進(jìn)行分類研究，通過(guò)聚類分析，估算遺傳距離，建立樹(shù)狀圖，當(dāng)相異系數(shù)為0.46時(shí)，39個(gè)牡丹品種明顯聚為兩大類，