四種鹀遺傳多樣性及親緣關系的AFLP分析.pdf

1、擴增片段長度多態(tài)性(AFLP)的檢測原理是基于對基因組進行限制性酶切和選擇性擴增所產生的DNA片段多態(tài)性。AFLP技術結合了RFLP技術的穩(wěn)定可靠性和RAPD技術的簡便高效性，多態(tài)性檢出率高。AFLP分析包括以下三個步驟：(i)基因組DNA的限制性內切酶消化和接頭的連接；(ii)限制性片段的擴增；(iii)擴增產物的分離與檢測。用這種方法，可以在不知道基因組序列信息的情況下獲得直觀的限制性酶切序列信息。這種方法可以使兩種特異的限制性內切

2、酶同時使用。酶切序列可以同時被檢測出來，但檢測效果取決于所采用的檢測方法。一般一次PCR在聚丙烯酰胺凝膠電泳下可以檢測出50～100條帶。因此，非常適于遺傳多樣性分析、遺傳作圖、親緣關系鑒定和分子標記研究。 鹀屬隸屬于雀形目鹀科，全世界共有38種，主要分布于歐洲、亞洲及北非，其中分布在中國境內的有26種，東北分布有18種。 早期鳥類分類和系統(tǒng)發(fā)育主要集中在外部形態(tài)及內部解剖學特征等宏觀領域的研究上。隨著研究的深入，發(fā)現外

3、形較接近的類群，僅用形態(tài)學性狀無法確定其系統(tǒng)關系，此時蛋白質和核酸分子結構檢測方法被應用于分類研究中，由于近幾年分子標記技術的出現使分類研究又有了新的發(fā)展。 由于AFLP技術比較復雜，對實驗操作的要求較高，國內迄今未有對鹀屬鳥類的AFLP研究報道，但對該鳥的核型及數量細胞分類研究已有一些報道。本研究首先在參考相關文獻的基礎上，對鹀屬基因組AFLP指紋圖譜構建的各項條件進行了優(yōu)化，并建立了穩(wěn)定的低成本的銀染AFLP分析體系。其次選

4、擇11對選擇性擴增引物進行擴增效果和多態(tài)性分析，尋找適宜鹀屬鳥類基因組分析的AFLP引物。 最后對四種鹀(三道眉草鹀2只；灰頭鹀5只；白頭鹀5只；白眉鹀6只)進行了AFLP多態(tài)性及親緣關系分析，探討AFLP應用于鹀屬鳥類親緣關系分析中的可行性，取得的主要結果如下： 1.對39對引物組合進行了篩選，其中11對具有較好的多態(tài)性。共得到535個標記位點，其中429個為多態(tài)位點，多態(tài)位點比率達80.1％。 2.根據Jac