體細(xì)胞化學(xué)誘導(dǎo)金銀花四倍體及抗鹽突變體研究.pdf

1、金銀花(Lonicera,japonica Thunb.)為忍冬科忍冬屬植物,又名二寶花、銀花、忍冬,是多年生半常綠藤本植株。金銀花自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥。目前,利用金銀花提取其有效成分綠原酸(chlorogenic acid)、異綠原酸(iso-chlorogenic acid)等,在治療溫病、風(fēng)熱感冒、咽喉腫痛、痢疾等癥狀有明顯的效果,在抗癌、抗病毒等方面也有較大的作用。
　　 本試驗(yàn)通過對(duì)“紅星2號(hào)”金銀花離體再生體系的

2、研究,為實(shí)現(xiàn)“紅星2號(hào)”金銀花的人工快繁與規(guī)?；M培生產(chǎn)奠定基礎(chǔ);通過組織培養(yǎng)和多倍體育種相結(jié)合的方法使“紅星2號(hào)”金銀花體細(xì)胞加倍,旨在獲得多倍體植株,為培育藥用價(jià)值更高的金銀花新品種提供理論依據(jù)。利用化學(xué)誘變技術(shù)與離體培養(yǎng)相結(jié)合的方法定向篩選金銀花耐鹽突變體,為金銀花栽培和進(jìn)一步推廣提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　 本試驗(yàn)以金銀花葉片為試材,對(duì)金銀花葉片離體再生體系及體細(xì)胞化學(xué)誘導(dǎo)金銀花四倍體和抗鹽突變體進(jìn)行了初步探討。主要研究結(jié)

3、果如下:
　　 1、金銀花葉片離體再生體系的建立
　　 以金銀花葉片為外植體,研究了2,4-D等植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生的影響。結(jié)果表明:最佳愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MB+1.0 mg/L2,4-D+0.5mg/L KT,愈傷誘導(dǎo)率達(dá)91.8%,生長良好;最佳不定芽分化培養(yǎng)基為MB+2.0mg/L6-BA+0.1mg/L,IBA,不定芽分化率達(dá)93.3%,且生長旺盛;最佳不定芽生根培養(yǎng)基為1/2 MB+2.0m

4、g/L IBA+0.2mg/L IAA,生根率達(dá)83.3%,且根較多,苗健壯。試管苗移栽成功率達(dá)89.3%。
　　 2、金銀花體細(xì)胞多倍體誘導(dǎo)及其鑒定
　　 在金銀花葉片再生體系的基礎(chǔ)上,進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng);采用秋水仙素浸泡法和混合培養(yǎng)法處理金銀花愈傷組織進(jìn)行多倍體誘導(dǎo),并比較不同方法和不同處理時(shí)間的變異率,以期獲得最有效的金銀花多倍體誘導(dǎo)方法。結(jié)果表明,不同處理方式對(duì)金銀花多倍體誘導(dǎo)率有顯著影響。浸泡法以0.1%秋水仙素

5、浸泡15h,四倍體誘導(dǎo)率達(dá)到最高,為30.5%。混合培養(yǎng)法以0.1%秋水仙素培養(yǎng)15d,四倍體誘導(dǎo)率達(dá)到最高,為21.2%。莖尖染色體壓片檢測表明,二倍體染色體數(shù)2n=2x=18,四倍體2n=4x=36,并獲得了同源四倍體金銀花植株(2n=4x=36)。四倍體金銀花植株與二倍體相比,葉片下表皮氣孔保衛(wèi)細(xì)胞減少,葉綠體數(shù)增多,葉型指數(shù)減小,生長緩慢。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)嵌合體現(xiàn)象。
　　 3、金銀花離體抗鹽突變體的篩選及生理特性研究

6、　　 用甲基磺酸乙酯(EMS)對(duì)金銀花離體葉片進(jìn)行處理,結(jié)果表明,隨著處理濃度和處理時(shí)間增加,葉片的分化率和存活率均下降,并篩選出半致死濃度(0.6%)和處理時(shí)間(6h)。利用篩選的EMS濃度和處理時(shí)間對(duì)離體葉片處理,在0.8%NaCl鹽濃度脅迫下進(jìn)行抗鹽突變體篩選,得到抗鹽性誘變?cè)偕仓?。?jīng)鑒定,其超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)活性增加,丙二醛(MDA)含量降低且脯氨酸(Pro)增加,表明篩選的金銀花突變?cè)偕仓贻^對(duì)