山羊骨骼肌表達(dá)載體pIMAU-EGFP的構(gòu)建.pdf

1、目前尚缺乏研究山羊肉品質(zhì)基因的適宜模型，有關(guān)山羊肉分子機(jī)理的研究還相對落后。鑒于轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在一系列潛在危險且改變基因組難度較大，本論文借鑒人類基因治療的理念和原理構(gòu)建了適合攜帶外源基因的山羊骨骼肌特異表達(dá)載體。我們利用骨骼肌α-肌動蛋白的調(diào)控原件，肌肉鈣粘蛋白M-cadherin的信號肽以及EGFP基因共同構(gòu)建了可以直接在動物體肌肉細(xì)胞內(nèi)異位表達(dá)并分泌EGFP的表達(dá)質(zhì)粒 pGEM-A5A3f-M-EGFP（pIMAU-EGFP）。該載

2、體的構(gòu)建為研究山羊肉肉品質(zhì)基因奠定了重要的基礎(chǔ)。
　　本研究得出的結(jié)論如下：
　　1、成功獲得本研究中的轉(zhuǎn)錄起始單元：骨骼肌α-肌動蛋白啟動子5’-側(cè)翼區(qū)核苷酸序列，大小為2440bp以及大小為816bp的攜帶Ploy(A)尾的骨骼肌α-肌動蛋白啟動子3-’側(cè)翼區(qū)核苷酸序列。通過測序驗證，表明構(gòu)建的表達(dá)載體中這部分元件是正確可靠的，可以行使轉(zhuǎn)錄驅(qū)動功能。
　　2、根據(jù)Genbank登錄號為：NM_007662的參考序列

3、，人工合成含有63bp的M-cadherin基因序列，限制性酶切位點(diǎn)，以及與EGFP基因有20bp重疊區(qū)的大引物M-m-cadherin，利用重疊延伸PCR技術(shù)成功獲得了本載體的核心基因M-EGFP。
　　3、本研究成功構(gòu)建了大小為6967bp，以M-EGFP為核心基因的骨骼肌特異表達(dá)載體pIMAU-EGFP，經(jīng)測序驗證其序列的正確性。M-cadherin基因和EGFP基因之間設(shè)計的雙酶切位點(diǎn)用于后續(xù)與肉品質(zhì)相關(guān)的候選基因的插入，