環(huán)氧化酶2抑制劑預(yù)防大鼠化學(xué)性乳腺癌

1、<p>　　環(huán)氧化酶2抑制劑預(yù)防大鼠化學(xué)性乳腺癌</p><p>　　【摘要】 目的： 觀察環(huán)氧化酶2 (COX2)選擇性抑制劑塞來昔布對化學(xué)致癌劑7，12二甲基苯蒽（DMBA）化學(xué)誘發(fā)的大鼠乳腺癌形成的影響. 方法： DMBA油劑灌胃復(fù)制大鼠乳腺癌模型，90只大鼠分為3組，單純誘癌組作為陰性對照、三苯氧胺組作為陽性對照、觀察塞來昔布對大鼠乳腺腫瘤發(fā)生率和bcl2, VEGF蛋白表達的影響.

2、結(jié)果： 三苯氧胺組（48.2%）和塞來西布組（50.0%）腫瘤發(fā)生率低于單純誘癌組（85.7%，分別為P=0.003，P=0.004）. 塞來昔布組VEGF蛋白表達率（42.9%）低于單純誘癌組（79.2%，P=0.023），和三苯氧胺組（46.2%）無差異（P=0.863）. 塞來昔布組bcl2蛋白表達率（42.9%）低于單純誘癌組（83.3%，P=0.010），低于三苯氧胺組（53.9%），但無差異（P=0.568）. 結(jié)論： 塞

3、來昔布能抑制DMBA誘發(fā)的大鼠乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，下調(diào)bcl2和VEGF蛋白表達可能是其機制之一. </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 乳腺腫瘤 化學(xué)預(yù)防 三苯氧胺 塞來昔布 環(huán)氧化酶2 </p><p><b>　　0引言 </b></p><p>　　環(huán)氧化酶(cyclooxygenase，COX)參與維持機體各種生理和病理過程. C

4、OX1是一種結(jié)構(gòu)酶，它催化產(chǎn)生的PG參與機體正常生理過程和保護功能，COX2被認(rèn)為是誘導(dǎo)型酶，只在病理情況下才表達，包括炎癥、損傷、修復(fù)及腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移. 許多癌前病變和惡性腫瘤均有COX2基因擴增和蛋白的高表達，有效抑制COX2的表達可能對腫瘤發(fā)生、發(fā)展具有重要意義［1-2］. 本研究在用化學(xué)致癌劑7，12二甲基苯蒽(7，12dimethylbenz anthracene，DMBA)誘發(fā)大鼠乳腺癌的過程中，觀察COX2

5、特異性抑制劑塞來昔布對DMBA化學(xué)誘發(fā)的乳腺癌形成及bcl2及VEGF蛋白表達的影響. </p><p><b>　　1材料和方法 </b></p><p><b>　　1.1材料 </b></p><p>　　實驗用未交配雌性SD大鼠90只，鼠齡（45±5）d，體質(zhì)量（110±10）g，以DMBA油

6、劑200 mg/kg灌胃復(fù)制大鼠乳腺癌模型. 每組30只大鼠，分為單純誘癌組（造模后正常飲食）作為陰性對照、三苯氧胺組（飲用水加入4 mg /kg三苯氧胺，正常飲用）作為陽性對照、塞來昔布組（飼料加入1000 mg/kg塞來昔布，用玉米油溶解后，拌于正常飼料內(nèi)喂養(yǎng)）. 觀察各組大鼠進食、毛發(fā)、排泄情況，并每周兩次檢測大鼠乳腺. </p><p><b>　　1.2方法 </b></p&

7、gt;<p>　　于實驗的第120日停藥，經(jīng)陰道涂片檢查，證實為間情期，以50 g/L烏拉坦液腹腔注射麻醉，將每個乳腺連同周圍皮膚、皮下組織解剖，自乳頭部對半切開乳腺進行大體觀測，計數(shù)腫瘤數(shù)量及形態(tài)，標(biāo)本固定于40 g/L甲醛溶液中，常規(guī)石蠟包埋，HE染色. 乳腺癌診斷參考實驗性大鼠乳腺癌分類診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］. </p><p>　　免疫組化SP法檢測bcl2和VEGF蛋白表達： 4 μm石蠟切片，

8、二甲苯常規(guī)脫蠟，梯度酒精水化，30 g/L H2O2甲醇室溫下封閉，微波爐修復(fù)抗原，非免疫性羊血清以阻斷組織中非特異性吸附，滴加兔抗鼠bcl2，VEGF多克隆抗體(1∶100)，濕盒內(nèi)4℃冰箱過夜，滴加生物素標(biāo)記的二抗 IgG，滴加辣根過氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片. 以細(xì)胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：無陽性染色；＋，彌散弱的胞漿染色， 染色細(xì)胞數(shù)＜10％； ，中

9、等至強的胞漿染色， 陽性細(xì)胞數(shù)介于10％～50％；，50％以上的細(xì)胞強染色. </p><p>　　統(tǒng)計學(xué)處理： 統(tǒng)計學(xué)檢驗采用SPSS 10.0軟件進行， P&lt;0.05為有顯著性差異. </p><p><b>　　2結(jié)果 </b></p><p>　　實驗結(jié)束前死亡大鼠未納入實驗結(jié)果統(tǒng)計，實驗結(jié)束時每組有完整數(shù)據(jù)的大鼠數(shù)為：

10、單純誘癌組28只，三苯氧胺組27只，塞來昔布組28只. </p><p>　　2.1單純誘癌組、三苯氧胺組和塞來昔布組乳腺癌發(fā)生率 </p><p>　　單純誘癌組24只大鼠發(fā)生乳腺癌，發(fā)生率為85.7％（24/28）；三苯氧胺組13只大鼠發(fā)生乳腺癌，發(fā)生率48.2%（13/27）；塞來昔布組14只大鼠發(fā)生乳腺癌，發(fā)生率50.0％（14/28）；三苯氧胺組、塞來昔布組乳腺癌發(fā)生率低于單純誘

11、癌組(χ2＝8.811， P=0.003；χ2＝8.187， P=0.004)；三苯氧胺組與塞來昔布組的乳腺癌發(fā)生率無顯著性差異(χ2＝0.019， P=0.891). </p><p>　　2.2VEGF蛋白在乳腺癌組織中的表達 </p><p>　　VEGF蛋白的陽性染色顆粒位于乳腺癌細(xì)胞的胞漿內(nèi)，部分內(nèi)皮細(xì)胞可見陽性著色，塞來昔布組（圖1A）與單純誘癌組（圖1B）比較，VEGF蛋白的

12、表達明顯減弱. VEGF蛋白在3組腫瘤組織中的表達為，3組之間陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.457，P=0.040)；塞來昔布組VEGF蛋白陽性表達率低于單純誘癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.179，P=0.023）；塞來昔布組VEGF蛋白陽性表達率與三苯氧胺組無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=0.030，P=0.863）. 三苯氧胺組和單純誘癌組VEGF蛋白陽性表達率有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=4.194，P=0.041，表1）.表1VEGF和b

13、cl2蛋白在單純誘癌組、三苯氧胺組、塞來昔布組乳腺癌組織中的表達(略) </p><p>　　2.3bcl2蛋白在乳腺癌組織中的表達 </p><p>　　bcl2蛋白的陽性染色顆粒位于乳腺癌細(xì)胞的胞漿內(nèi)，部分內(nèi)皮細(xì)胞可見陽性著色，塞來昔布組（圖2A）與單純誘癌組（圖2B）比較，bcl2蛋白的表達明顯減弱. bcl2蛋白在3組腫瘤組織中的表達為，塞來昔布組bcl2蛋白陽性表達率低于

14、單純誘癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.705，P=0.010）；塞來昔布組bcl2蛋白陽性表達率與三苯氧胺組無統(tǒng)計學(xué)差異 （χ2=0.326， P=0.568）； 三苯氧胺組bcl2蛋白陽性表達率低于單純誘癌組， 但無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=3.718， P=0.054, 表1）. </p><p><b>　　3討論 </b></p><p>　　乳腺癌是女性最常見

15、的惡性腫瘤之一，三苯氧胺是乳腺癌預(yù)防和治療的一線用藥和金標(biāo)準(zhǔn). 許多癌前病變和惡性腫瘤中均有COX2基因的擴增和蛋白的高表達，有效抑制COX2的表達對預(yù)防腫瘤發(fā)生發(fā)展有重要意義. 本研究采用三苯氧胺作為陽性對照，在大鼠化學(xué)性乳腺癌的發(fā)生過程中，觀察塞來昔布對大鼠乳腺癌形成的影響，并探討其抗腫瘤形成的機制. </p><p>　　本研究發(fā)現(xiàn)，塞來昔布組乳腺腫瘤發(fā)生率明顯低于單純誘癌組，表明塞來昔布能有效抑制DM

16、BA誘發(fā)的大鼠化學(xué)性乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展，對乳腺癌高危人群預(yù)防具有潛在的應(yīng)用價值. 其他學(xué)者也有類似報道， Harris等［4］用塞來昔布處理DMBA誘導(dǎo)的乳腺癌模型，發(fā)現(xiàn)塞來昔布能明顯延遲腫瘤的發(fā)生，與優(yōu)布芬相比更加有效. 飼料內(nèi)混入塞來昔布乳腺癌的發(fā)生率，多發(fā)率及腫瘤體積，較對照組低. </p><p>　　COX2參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的機制尚不完全清楚，可能包括：刺激增殖、抑制凋亡、抑制免疫機能、參與前致癌物

17、的代謝等途徑. COX2 過度表達可剌激腫瘤新生血管的形成，但其機制尚未完全明確，其直接產(chǎn)物PGE2能直接刺激血管生成；同時， PGE2能誘導(dǎo)組織生成VEGF，產(chǎn)生的VEGF以旁分泌和自分泌的形式作用于內(nèi)皮細(xì)胞，從而促進血管形成. 本研究發(fā)現(xiàn)，在塞來昔布處理的腫瘤組織中，VEGF蛋白的表達水平明顯低于單純誘癌組，表明作為VEGF的上調(diào)因子，抑制COX2的表達和活性可明顯下調(diào)VEGF的表達，兩者具有明顯的相關(guān)性. 人結(jié)腸癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染C

18、OX2 基因發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞在過度表達COX2 的同時促血管生成因子VEGF, bFGF, PDGF, 內(nèi)皮素等均明顯上調(diào),并促進人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株增殖并形成網(wǎng)狀的內(nèi)皮細(xì)胞條索［5］. Chang等［6］的研究也認(rèn)為COX2誘導(dǎo)的乳腺癌發(fā)生發(fā)展和PGE2依賴的的腫瘤新血管生成關(guān)系密切. 譙敏等［7］發(fā)現(xiàn)以COX2為靶向的RNA干擾顯著抑制胃癌細(xì)胞生長,可能與下調(diào)COX2基因表達和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，這些均說明COX2能刺激腫瘤新血

19、管生成，而下調(diào)V</p><p>　　Celecoxib 抑制細(xì)胞凋亡的機制還不完全清楚，包括增加bcl2表達、減弱NO信號途徑和阻斷AKT磷酸化等途徑. bcl2是主要的抗凋亡和抗氧化蛋白，COX2可上調(diào)bcl2蛋白表達，同時下調(diào)凋亡蛋白bax和bclXL的表達［8］. 本研究發(fā)現(xiàn)塞來昔布處理后的腫瘤組織細(xì)胞的bcl2表達在蛋白水平上明顯低于對照組，差異具有顯著性，表明通過下調(diào)bcl2的表達、誘導(dǎo)

20、凋亡產(chǎn)生是塞來昔布的抗腫瘤機制之一. </p><p>　　我們的研究表明，選擇性COX2抑制劑塞來昔布可以有效預(yù)防大鼠乳腺癌的發(fā)生，機制可能與下調(diào)VEGF和bcl2蛋白表達有關(guān). </p><p><b>　　【參考文獻】 </b></p><p>　　［1］Masferrer JL, Leahy KM, Koki AT, et al.

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