榨菜離體培養(yǎng)體系建立及秋水仙素誘導(dǎo)多倍體的研究.pdf

1、本研究以4個(gè)榨菜(Brassica juneea Czern.et Coss.var.tumida)株系B2-1014，B2-1020，BZ⊕-1005，BZ⊕-1003為材料，利用榨菜離體培養(yǎng)及實(shí)生苗處理誘導(dǎo)多倍體的方法，對影響榨菜離體植株再生及秋水仙素誘導(dǎo)多倍體影響因素進(jìn)行了研究，初步建立了榨菜的多倍體誘導(dǎo)方法。同時(shí)對游離小孢子培養(yǎng)誘導(dǎo)胚狀體進(jìn)行了初步的研究，為下一步研究誘導(dǎo)單倍體植株，并進(jìn)行加倍得到榨菜二倍體植株打下了基礎(chǔ)。研究結(jié)

2、果如下：
　　 ⑴通過對榨菜4個(gè)株系的莖尖及下胚軸進(jìn)行離體培養(yǎng)，均能成功誘導(dǎo)出愈傷組織，其中以榨菜株系B2-1014誘導(dǎo)率最高，為49.0％，利剛愈傷組織誘導(dǎo)率高的株系B2-1014進(jìn)行離體培養(yǎng)，篩選出其最佳再生培養(yǎng)基組合：愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+0.5mg/L6-BA+0.8mg/LNAA)；不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基(MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA)；不定根誘導(dǎo)的培養(yǎng)基(MS+0.2 mg/LNAA)。下胚軸

3、與莖尖最佳再生培養(yǎng)基組合相同，但其誘導(dǎo)效果不同，莖尖離體培養(yǎng)：愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)95.6％，不定芽再生率達(dá)95.6％，生根率達(dá)100％；下胚軸離體培養(yǎng)：愈傷組織的誘導(dǎo)率達(dá)90.0％，不定芽再生率達(dá)92.2％，生根率達(dá)97.8％。不同苗齡對榨菜再生頻率呈顯著性影響，以莖尖做外植體，其苗齡為5 d時(shí)分化能力最強(qiáng)，下胚軸則是4 d。
　　 ⑵通過組織培養(yǎng)利實(shí)生苗處理誘導(dǎo)榨菜多倍體均能獲得四倍體植株，不同的處理方式、處理?xiàng)l件可以產(chǎn)生不同

4、的誘導(dǎo)效果。在組織培養(yǎng)中，以株系B2-1014進(jìn)行誘導(dǎo)，莖尖為外植體、秋水仙素濃度0.4％、培養(yǎng)48 h時(shí)四倍體誘導(dǎo)效果最好，為30％；在相同條件下，下胚軸為外植體，四倍體誘變率為15.6％。利用實(shí)生苗處理進(jìn)行榨菜多倍體誘導(dǎo)，以點(diǎn)滴生長點(diǎn)(2.0g/L)和浸根(40 mg/L處理時(shí)間3d)同時(shí)處理四倍體誘變率最高，為14.4％，灌根處理(40 mg/L，處理時(shí)間3d)四倍體誘變率最低，為7.8％：榨菜不同株系多倍體的誘變率不同，4種材料

5、中以榨菜株系B2-1014四倍體誘導(dǎo)效果最好，顯著高于其他株系。不同處理方法的最適苗齡相同，3片葉的四倍體誘變率最高。
　　 ⑶對榨菜4個(gè)株系進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)中，不同株系、不同基本培養(yǎng)基其胚狀體誘導(dǎo)率不同。在不同株系與基本培養(yǎng)基的組合中，B2-1014在1/2NLN基本培養(yǎng)基中的胚狀體誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為31.1％。而同樣采劇1/2NLN基本培養(yǎng)基，B2-1020，BZ⊕-1005，BZ⊕-1003的胚狀體誘導(dǎo)率分別為8.9