光果甘草植株再生體系的建立及多倍體誘導(dǎo).pdf

1、本文以光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）為研究對象，探討了光果甘草愈傷組織的誘導(dǎo)和分化，芽增殖及生根的最佳培養(yǎng)條件。通過秋水仙素誘導(dǎo)光果甘草種子、種子苗及莖段來獲得光果甘草多倍體材料。通過組織培養(yǎng)獲得愈傷組織，利用分光光度法和HPLC法檢測其中總黃酮及甘草酸含量。
　　 以光果甘草無菌苗的胚根、下胚軸、子葉、真葉、芽及節(jié)間為外植體，分別接入含有不同激素的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)6種外植體都能誘導(dǎo)出愈傷組織

2、。芽為最佳誘導(dǎo)愈傷組織材料，MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。芽來源愈傷組織在分化培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L上培養(yǎng)，愈傷組織產(chǎn)生綠色叢生芽，分化率高達(dá)97.87%。在培養(yǎng)基MS+IBA 1.0mg/L中，生根率高達(dá)80%。生根苗移栽至經(jīng)過滅菌處理的基質(zhì)（蛭石：沙土=1：1）上，移栽28d后成活率達(dá)到95%。
　　 以光果甘草種子、種子苗及莖段為研究材料，用秋

3、水仙素浸種法、秋水仙素瓊脂涂抹法、秋水仙素浸泡莖段法三種方法處理，誘變光果甘草多倍體。實驗發(fā)現(xiàn)秋水仙素浸泡莖段法為最佳處理方法。將秋水仙素處理過的莖段，在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L上培養(yǎng)，以獲取愈傷組織。利用分光光度法及HPLC法測定愈傷組織中總黃酮及甘草酸的含量。當(dāng)200mg/L秋水仙素處理12h時，愈傷組織中總黃酮含量達(dá)到最高，為41.915mg/g。在愈傷組織中未檢測到甘草酸。選取培養(yǎng)10天分裂旺盛的愈

4、傷組織進(jìn)行核型分析。在400mg/L秋水仙素處理24h時，莖段變異率最高，為38.89%。
　　 另外，用6種光果甘草外植體在含有不同激素類型及添加物（水解乳蛋白）的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織。培養(yǎng)28d后，獲得愈傷組織，利用分光光度法及HPLC法測定愈傷組織中總黃酮及甘草酸的含量。節(jié)間為最佳處理材料。在培養(yǎng)基MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 1.0mg/L上培養(yǎng)，節(jié)間愈傷組織中總黃酮含量最高，為23.155±0.015mg/g