皮質(zhì)酮對肉雞骨骼發(fā)育影響機理的研究.pdf

1、現(xiàn)代肉雞品種的選育過程中，注重肉雞增重速度的選育方式對內(nèi)雞的生理機能產(chǎn)生了顯著的影響，常導(dǎo)致肉雞腿病的發(fā)生，不僅影響動物福利，同時也帶來了較大的經(jīng)濟損失。肉雞品種本身的快速生長對其骨骼系統(tǒng)生長發(fā)育產(chǎn)生的內(nèi)源性應(yīng)激是腿病發(fā)生的重要成因之一。禽類在應(yīng)激狀態(tài)下，下丘腦-垂體-腎上腺素軸被激活，大量分泌糖皮質(zhì)激素—皮質(zhì)酮。皮質(zhì)酮是在多種生物中（包括微生物、植物、低等生物和脊椎動物）廣泛存在的一種糖皮質(zhì)激素，參與體內(nèi)眾多生命過程的調(diào)控。糖皮質(zhì)激素

2、分泌過多常導(dǎo)致骨質(zhì)丟失和骨骼的生長發(fā)育紊亂。生長板的軟骨內(nèi)成骨過程是長骨發(fā)育的中心環(huán)節(jié)。生長板的生長發(fā)育受到包括皮質(zhì)酮在內(nèi)的多種因子的調(diào)控。目前，皮質(zhì)酮影響肉雞骨骼發(fā)育的相關(guān)研究鮮有報道。因此，本研究的目的在于研究皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)對生長肉雞骨骼形態(tài)學、生物力學、組織學等特性的影響，以及從細胞水平進一步查明CORT影響體外培養(yǎng)的軟骨細胞增殖與分化的分子機制。
　　1、皮質(zhì)酮對肉雞骨骼生長發(fā)育的影響

3、r>　　100只1日齡的Ross308白羽肉雞，隨機分為兩組，每組50只。從試驗的第7d開始持續(xù)一周，處理組肉雞每天注射皮質(zhì)酮（4mg/kg體重），對照組注射等量溶劑玉米油。于試驗的第14d和21d檢測肉雞的體重、采食量、相對器官重、血液生化指標以及骨骼參數(shù)的變化。結(jié)果顯示:皮質(zhì)酮處理一周后，處理組體重和采食量顯著降低，但肝臟的相對重量明顯升高。骨長度、骨指數(shù)、骨密度以及骨骼的斷裂強度均顯著低于對照組。組織學和免疫組織化學的結(jié)果顯示，皮

4、質(zhì)酮處理顯著降低脛骨生長板增殖區(qū)和肥大前區(qū)的寬度以及Ⅹ型膠原陽性細胞的數(shù)量。該試驗結(jié)果表明，皮質(zhì)酮顯著降低肉雞的生產(chǎn)性能，同時通過抑制生長板軟骨細胞的增殖和分化，對肉雞長骨的縱向生長產(chǎn)生影響。
　　2、皮質(zhì)酮對內(nèi)雞生長板軟骨細胞增殖、分化的影響
　　采用6周齡的肉雞，分離生長板軟骨細胞進行原代培養(yǎng)，48h后向培養(yǎng)基中加入不同濃度的CORT(10-10～10-6M)，繼續(xù)培養(yǎng)12h、24h和72h后檢測軟骨細胞活性。與CORT

5、共孵育48h后，測定ALP的活性，并用實時定量PCR技術(shù)檢測軟骨細胞的甲狀旁腺激素相關(guān)肽(PTHrP)、Indianhedgehog(Ihh)、轉(zhuǎn)錄因子Runx2以及Ⅹ型膠原的mRNA表達，用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測軟骨細胞中Ⅹ型膠原蛋白的表達量。在10-9～10-6M濃度范圍內(nèi)，CORT顯著抑制軟骨細胞的增殖活性和ALP的活性。10-8M和10-6M的CORT顯著抑制PTHrP、Runx2和Ⅹ型膠原的mRNA的表達，同時卻顯著增強Ihh的