名貴楓斗類石斛的分子鑒別及微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā)研究.pdf

1、石斛為傳統(tǒng)名貴中藥材，歷史悠久，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就被列為上品，有滋陰清熱、生津益胃、潤(rùn)肺止咳等功效。根據(jù)形態(tài)特征和加工規(guī)格的不同，分為楓斗類石斛和黃草類石斛兩大類，而鐵皮石斛、兜唇石斛、齒瓣石斛皆屬名貴楓斗類石斛。本文作者擬運(yùn)用一種基于適配器連接介導(dǎo)的等位基因特異性擴(kuò)增法對(duì)鐵皮石斛、兜唇石斛、齒瓣石斛等名貴的楓斗類石斛進(jìn)行鑒別研究。通過三條特異性引物和一條通用引物，兜唇石斛、齒瓣石斛、鐵皮石斛分別擴(kuò)增出大小為198 bp、250 b

2、p、310 bp的片段。三條片段可以在2.0％的瓊脂糖凝膠電泳清晰分開。此外運(yùn)用這四條引物，在其它14種楓斗類石斛中沒有擴(kuò)增出任何片段。研究結(jié)果表明，通過同時(shí)檢測(cè)rDNA ITS的三個(gè)特異性位點(diǎn)，ALM-ASA 可以鑒別此三種名貴楓斗類石斛。
　　 本研究對(duì)常見楓斗類石斛的葉綠體基因組psbA-trnH 區(qū)進(jìn)行了測(cè)定，利用MEGA 3.0 對(duì)該區(qū)序列進(jìn)行了比較分析。結(jié)果顯示：15種楓斗類石斛psbA-trnH序列長(zhǎng)度為721-7

3、67 bp，變異位點(diǎn)42個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)11個(gè)。以Kimura-2 參數(shù)計(jì)算遺傳距離，15種楓斗類石斛種間遺傳距離在0.0013-0.0183，平均遺傳距離為0.0148。不同石斛種間均存在序列差異，全序列中共出現(xiàn)6處indels，導(dǎo)致種間片段長(zhǎng)度差異較大。楓斗類石斛居群間psbA-trnH 區(qū)序列暫沒發(fā)現(xiàn)差異。
　　 本研究還運(yùn)用磁珠富集法對(duì)報(bào)春石斛的微衛(wèi)星進(jìn)行了開發(fā)。開發(fā)步驟如下：
　　 用Sau3AI 酶切報(bào)春石斛