鵪鶉胚胎早期PGCs遷移規(guī)律以及性腺發(fā)育的研究.pdf

1、本課題對(duì)鵪鶉原始生殖細(xì)胞(primordial germ cells，PGCs)的發(fā)生、遷移及性腺的分化和發(fā)育規(guī)律，在顯微水平上進(jìn)行了全面而系統(tǒng)的研究。試驗(yàn)的主要結(jié)果如下： 1.采用免疫組化的方法追蹤鵪鶉胚胎早期PGCs發(fā)生和遷移的過(guò)程，染色結(jié)果觀察顯示，鵪鶉PGCs在未孵化期幾乎都分布在胚盤(pán)暗區(qū)，主要在與明區(qū)相交界的部位，有分離的細(xì)胞也有成對(duì)存在的。孵化12h的胚盤(pán)，PGCs大多數(shù)位于明區(qū)，緊靠明暗交界區(qū)域，并有三個(gè)聚在一起出

2、現(xiàn)的。孵化19h的胚盤(pán)，PGCs集中分布于胚體頭前側(cè)部的明區(qū)中，即生殖新月區(qū)。未分化期時(shí)的PGCs數(shù)為2～3個(gè)，到原條期已增至100多個(gè)，亦為PGCs的增殖高峰期。而在一體節(jié)之后，PGCs群落分布趨向于血管網(wǎng)的形成區(qū)域。孵化27h，已有少量PGCs分布于明區(qū)的血管中。到孵化36h時(shí)，有大量的的PGCs聚集在明區(qū)血管網(wǎng)中，左右兩側(cè)都有，PGCs數(shù)目為檢測(cè)各個(gè)時(shí)期最多。孵化45h時(shí)，從頭部到臍腸系膜PGCs均有散在和聚團(tuán)分布，并主要聚集在頭

3、部間充質(zhì)的血管中。 2.在對(duì)鵪鶉胚胎期性腺分化時(shí)間的研究中，觀察到，孵化第4d，PGCs已經(jīng)遷移到原始性腺內(nèi)，并與其一起形成未分化的性腺。在孵化第5d時(shí)，性腺開(kāi)始顯現(xiàn)出卵巢和睪丸的特征。卵巢分化時(shí)可以明顯觀察到性腺上皮有一層PGCs大小樣的細(xì)胞層，其與下層明顯分為兩部分，即致密的皮質(zhì)層和疏松的髓質(zhì)層；精巢分化時(shí)，上皮下為幾層間充質(zhì)細(xì)胞形成的早期白膜，使實(shí)質(zhì)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)與上皮分開(kāi)，實(shí)質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞團(tuán)索有向早期曲精細(xì)管索發(fā)育的趨向。因此在組

4、織學(xué)水平上，孵化第5d即為鵪鶉胚胎性腺分化的時(shí)間。 3.通過(guò)組織學(xué)方法觀察鵪鶉胚胎各期睪丸的組織結(jié)構(gòu)特征，研究睪丸的發(fā)育規(guī)律。結(jié)果表明：孵化第7～9d，睪丸的形態(tài)特征逐漸明顯；孵化第10d，睪丸索形成并且PGCs分化為精原細(xì)胞；孵化第12d，精原細(xì)胞呈葡萄狀或鏈狀分布在曲精細(xì)管內(nèi)，并有少量的成熟型間質(zhì)細(xì)胞和血管填充于管腔之間；孵化第15d時(shí)，曲細(xì)精管明顯變粗、數(shù)量增多，精原細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂而迅速增殖；到孵化結(jié)束第17d時(shí)，睪丸的

5、形態(tài)趨于成熟，曲精細(xì)管清晰可辨，大量的間質(zhì)細(xì)胞、結(jié)締組織和血管填充于管腔內(nèi)。 4.對(duì)鵪鶉胚胎期卵巢的連續(xù)切片進(jìn)行H.E染色，結(jié)果觀察到：孵化第7d，右側(cè)卵巢開(kāi)始慢慢退化，極少數(shù)PGCs開(kāi)始分化為卵原細(xì)胞；孵化10 d，卵巢明顯區(qū)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)部分，皮質(zhì)部外區(qū)分布有大量增殖的卵原細(xì)胞群，呈合胞體結(jié)構(gòu)；孵化11 d，卵原細(xì)胞數(shù)量增加，皮質(zhì)部逐漸變厚，髓質(zhì)部變??；孵化13 d，卵巢皮質(zhì)部開(kāi)始出現(xiàn)早期的原始卵泡；孵化14 d，卵巢皮質(zhì)部

6、出現(xiàn)大量原始卵泡，數(shù)量逐漸增多；孵化第17和出雛1d時(shí)，卵巢的形態(tài)趨于成熟，觀察到初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡，卵泡形態(tài)清晰，數(shù)量較多，卵泡間基質(zhì)豐富，髓質(zhì)中充滿血管。 5.對(duì)于目前熱點(diǎn)研究中的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，家禽中比較集中于雞，鵪鶉作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的優(yōu)點(diǎn)，是本實(shí)驗(yàn)選取其作為實(shí)驗(yàn)素材的原因。填補(bǔ)此空白并想在鵪鶉上進(jìn)行相關(guān)轉(zhuǎn)基因技術(shù)和胚胎干細(xì)胞技術(shù)，就必須對(duì)早期胚胎在體內(nèi)發(fā)育的基本理論進(jìn)行了解，系統(tǒng)的描述早期PGCs的起源、遷移和增殖規(guī)律，以及性腺