北美—球懸鈴木轉基因受體系統(tǒng)的建立及遺傳轉化研究.pdf

1、 本研究以北美一球懸鈴木莖段為外植體，系統(tǒng)研究了組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基、植物激素、有機附加物等因素對芽誘導、不定芽增殖及不定芽生根的影響；建立了適于北美一球懸鈴木遺傳轉化的穩(wěn)定高效的組培受體系統(tǒng)；研究了9個影響北美一球懸鈴木轉化效果的因素，確定了較為合適的北美一球懸鈴木葉盤轉化體系，為北美一球懸鈴木基因工程育種提供了關鍵的技術平臺。從北美一球懸鈴木截冠植株上采取當年生萌蘗枝條作為起始外植體，讓外植體帶有部分葉柄進行消毒，避免直接消毒Hg

2、Cl2對裸芽的傷害。在芽增殖培養(yǎng)基上繼代4次之前，每次繼代芽的增殖水平無變化；繼代4次以后，隨著繼代次數的增加，增殖系數有明顯的遞增趨勢；但第9代起，開始出現玻璃苗，而且隨后幾代盡管增殖系數顯著增加，但玻璃化越趨嚴重，而有效芽的增殖系數大大下降。本實驗設計了兩條生根技術路線：一步法生根，將不定芽直接接種在含有機物質R150mg/L的DCR上；二步生根法，先將不定芽接種在含有機物質R60mg/L的DCR上15d左右，再轉接至DCR基本培養(yǎng)

3、基上。兩條途徑的生根率均有100﹪?！　〗⒘艘员泵酪磺驊意從驹嚬苊珥敹说牡谝?、二片完全展開的葉片為外植體，探討了暗培養(yǎng)時間、蔗糖濃度、NAA、IBA、6-BA、KT、ZT、TDZ濃度等因素對葉盤分化不定芽的影響，最終建立了以葉盤為外植體的高頻再生系統(tǒng)。研究發(fā)現：以MS為基本培養(yǎng)基并附加IBA0.5mg/L、6-BA1.5mg/L、KT0.5mg/L、蔗糖30g/L，對北美一球懸鈴木葉盤誘導不定芽是最有效的培養(yǎng)基，暗培養(yǎng)7d時，芽誘導

4、頻率、平均芽數和芽形成能力最高，分別為82.7﹪、4.2和3.47。經實驗還發(fā)現：TDZ在一球懸鈴木的葉盤培養(yǎng)中，沒有類似于細胞分裂素的作用，非但不能促進不定芽分化，反而有抑制作用。　　本試驗已建立起一個高效的北美一球懸鈴木葉盤離體再生及遺傳轉化受體系統(tǒng)，可以進一步開展農桿菌介導的北美一球懸鈴木轉基研究。探討Ap(氨芐青霉素)、Cb(羧芐青霉素)、Cef(頭孢霉素)等三種常用的抑菌性抗生素對葉盤分化不定芽的影響。　　測試了Km對葉盤