蘿卜離體再生體系及小孢子和原生質(zhì)體分離方法的研究.pdf

1、本研究以蘿卜品種‘魯蘿卜一號’及兩個蘿卜自交系(W、R)為試材，對蘿卜組織和器官的離體培養(yǎng)體系以及小孢子、原生質(zhì)體的分離方法進(jìn)行了研究，以探索蘿卜離體培養(yǎng)和再生途徑，為蘿卜的遺傳轉(zhuǎn)化、體細(xì)胞雜交等生物技術(shù)育種提供依據(jù)。獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.‘魯蘿卜一號’離體再生體系的探討帶下胚軸的莖端為不定芽誘導(dǎo)的最適外植體;MS+3mg/L6-BA+0.5mg/LNAA為不定芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基，MS+3mg/L6-BA+0.2mg/

2、LNAA為不定芽繼代增殖的適宜培養(yǎng)基，但在該種培養(yǎng)基上繼代5次后，需適當(dāng)提高6-BA濃度，才能保持較高的增殖水平。以半子葉為外植體，培養(yǎng)基為MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA時，有利于愈傷組織的誘導(dǎo);在此培養(yǎng)基中添加5mg/LAgNO3有利于愈傷組織的繼代與保存;將愈傷組織轉(zhuǎn)接在培養(yǎng)基MS+6mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+5mg/LAgNO3上，獲得了再分化芽。
　　 2.自交系W、R離體再生體系的探討W、

3、R自交系都是以MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA為不定芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基，以MS+5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA為不定芽繼代增殖最適培養(yǎng)基。W、R都是以半子葉為外植體時愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好;W以MS+3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA培養(yǎng)基愈傷組織的誘導(dǎo)率較高，R以MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA培養(yǎng)基愈傷組織的誘導(dǎo)率較高;W、R都是分別在各自最適的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加5mg/LAgNO3作

4、為繼代培養(yǎng)基時繼代效果最好。
　　 3.種子春化的蘿卜莖端離體培養(yǎng)萌動的種子經(jīng)酒精消毒1min后，于4℃下處理30天，供試的三個品種（系）均可順利通過春化。將經(jīng)春化的種子播種于培養(yǎng)基上，獲得無菌苗后，切取莖端，利用上述所篩選的培養(yǎng)基配方，進(jìn)行芽的誘導(dǎo)和繼代;將獲得的芽再轉(zhuǎn)接于成苗培養(yǎng)基MS+0.2mg/LNAA上，30天后可見瓶內(nèi)開花植株。
　　 4.蘿卜小孢子分離方法的研究每次擠壓處理20個花蕾可以獲得質(zhì)量好、數(shù)量適宜

5、的游離小孢子;通過30/40/50蔗糖密度梯度離心，可以獲得清晰的兩條帶，經(jīng)檢測第一條帶為大部分處于單核期的小孢子層。由4℃處理2天的溫室植株花蕾、溫室植株花蕾、組培瓶中花蕾分離的小孢子活力前兩者差異顯著，后兩者差異不顯著。
　　 5.蘿卜原生質(zhì)體分離方法的研究子葉和下胚軸兩種材料均在12-14h時酶解效果最好。在最佳酶解時間下，子葉的酶解產(chǎn)量均達(dá)到下胚軸的10倍。利用兩種酶組合處理，在子葉和下胚軸兩種材料上酶解對比發(fā)現(xiàn)，用Ce