臺(tái)灣蟲草無(wú)性型——黃山被毛孢培養(yǎng)條件研究.pdf

1、本文以臺(tái)灣蟲草（Cordyceps formosana）的無(wú)性型黃山被毛孢（Hirsutella huangshanensis） RCEF0868菌株為對(duì)象，研究其生長(zhǎng)規(guī)律，內(nèi)容包括液態(tài)搖瓶培養(yǎng)、固態(tài)平皿培養(yǎng)和大米培養(yǎng)基培養(yǎng)條件；此外，還以黃粉蟲為替代寄主進(jìn)行了侵染研究。
　　 以菌絲產(chǎn)量為指標(biāo)，對(duì)RCEF0868菌株的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明：該菌株在液態(tài)搖瓶培養(yǎng)基和固態(tài)瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)曲線基本一致。
　　

2、液態(tài)培養(yǎng)生長(zhǎng)研究表明：從接種至第15d生長(zhǎng)緩慢，為遲緩期；從第15d開始至第25天菌絲生長(zhǎng)迅速，為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：第25～30d菌絲生長(zhǎng)變化不大，為穩(wěn)定期；從第30d開始，菌絲開始減少，入衰亡期。菌絲體最高產(chǎn)量出現(xiàn)在第25d，為0.5378g/100mL。固態(tài)培養(yǎng)生長(zhǎng)研究因指標(biāo)不同，結(jié)果稍有變化。以菌落直徑為指標(biāo)，遲緩期為0～15d，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為15～25d，穩(wěn)定期為25～40d，衰亡期在40d以后。以菌絲質(zhì)量為指標(biāo)，在生長(zhǎng)的第30天菌絲體

3、生長(zhǎng)才達(dá)到峰值。濕重和干重分別為0.3604g/皿和0.0702g/皿，且含水率也是最高，達(dá)到80.54％。
　　 通過(guò)液態(tài)搖瓶培養(yǎng)條件和固態(tài)平皿培養(yǎng)條件，發(fā)現(xiàn)了碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)條件和溫度、pH、溶氧、濕度、接種量、光照等培養(yǎng)條件對(duì)RCEF0868菌株生長(zhǎng)和發(fā)育的影響。
　　 單營(yíng)養(yǎng)因素的研究表明：葡萄糖、蛋白胨、酵母浸出粉、MgSO4·7H2O、ZnSO4、K2HPO4、CaCl2對(duì)菌株生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。葡萄糖作

4、為速效碳源對(duì)于菌株的生長(zhǎng)效果最好，蔗糖的效果次之，菌株對(duì)利用可溶性淀粉、麥芽糖和α-乳糖的效果依次減弱。對(duì)于葡萄糖而言，最佳的濃度為40g/L。濃度過(guò)低，碳源不能滿足生長(zhǎng)的需要；濃度過(guò)高，會(huì)抑制其生長(zhǎng)。氮源對(duì)與菌株的生長(zhǎng)是不可或缺的，在沒(méi)有氮源的培養(yǎng)基上，菌絲不生長(zhǎng)。供試菌株在含有有機(jī)氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，在無(wú)機(jī)氮源培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，可以認(rèn)為在設(shè)計(jì)濃度范圍內(nèi)，有機(jī)氮為RCEF0868菌株的合適氮源。其中蛋白胨10g/L和酵母浸出粉10g

5、/L為最高分別為0.631g和0.6396g最佳氮源。某些無(wú)機(jī)鹽菌株的生長(zhǎng)也有一定的促進(jìn)作用。在供試的8種無(wú)機(jī)鹽中，只有MgSO4·7H2O、ZnSO4、K2HPO4、CaCl2在某些濃度對(duì)菌株的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。通過(guò)正交試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這四種無(wú)機(jī)鹽對(duì)結(jié)果的影響順序?yàn)閆nSO4>MgSO4·7H2O> CaCl2> K2HPO4。通過(guò)正交方差分析，這四個(gè)因子對(duì)指標(biāo)的影響都達(dá)到極顯著水平（p<0.01）。因此，最佳的無(wú)機(jī)鹽配比為ZnSO45μg/

6、L、MgSO4·7H2O20μg/L、CaCl25μg/L、K2HPO410μg/L。綜合碳源和氮源研究結(jié)果，得到培養(yǎng)RCEF0868菌株的最佳營(yíng)養(yǎng)條件，即葡萄糖40g/L、蛋白胨10g/L、酵母浸出粉10g/L、ZnSO45μg/L、MgSO4·7H2O20μg/L、CaCl25μg/L、K2HPO410μg/L。
　　 培養(yǎng)條件研究結(jié)果表明：溫度、pH、溶氧、濕度、接種量、光照等培養(yǎng)對(duì)菌株的生長(zhǎng)和發(fā)育有顯著的作用。RCEF0

7、868菌株，在pH6.0～7.0范圍內(nèi)生長(zhǎng)良好，以pH6.5為最佳。最佳的生長(zhǎng)溫度是25℃。液態(tài)培養(yǎng)裝液量100mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速160rpm，接種量1×108個(gè)孢子/mL孢子懸浮液5mL，菌絲體的生長(zhǎng)情況最佳。
　　 光照條件研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)和發(fā)育有極大的影響，在無(wú)光的暗環(huán)境下菌絲生長(zhǎng)旺盛，在光照環(huán)境下菌體迅速向繁殖階段過(guò)度。最佳光照條件是接種好后在暗環(huán)境下培養(yǎng)20d，然后光照培養(yǎng)。
　　 在研究了

8、RCEF0868菌株的生長(zhǎng)曲線、營(yíng)養(yǎng)條件和培養(yǎng)條件后，以之為參考進(jìn)行該菌株在大米培養(yǎng)基生長(zhǎng)生長(zhǎng)的研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在固定大米質(zhì)量不變的情況下，料水比為1：1.5菌落生長(zhǎng)情況最為良好。以孢子濃度為1×108個(gè)孢子/mL的懸浮液為種子，接種5mL和10mL生長(zhǎng)情況較好?？紤]到實(shí)驗(yàn)方便的因素，確定5mL為最佳接種量。
　　 以黃粉蟲為代替宿主，比較了孢子懸浮液浸漬、菌絲懸浮液浸漬、菌落接觸這三種侵染方法。研究結(jié)果表明，孢子懸浮液和菌