磷壁酸在金黃色葡萄球菌與腸黏膜細胞互作過程中的作用.pdf

1、脂磷壁酸(Lipoteichoic acid，LTA)作為革蘭氏陽性菌胞壁共有的一種特有成分，在金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SAU)的致病過程中發(fā)揮重要作用。本論文旨在研究用TrionⅩ-114法提取的磷壁酸在金黃色葡萄球菌與腸黏膜上皮細胞互作過程中的作用。
　　試驗一:用TrionⅩ-114法提取LTA，經(jīng)DEAE-Sephacel、Sephedex G-10凝膠層析柱純化，得到的LTA通過磷鉬酸

2、法檢測磷含量，紫外掃描儀檢測蛋白質(zhì)和核酸殘留量，并經(jīng)紅外光譜儀和核磁共振儀分析、鑒定LTA的結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，TrionⅩ-114法提取磷壁酸雖然得率較低，僅為細菌重量的0.83‰(m/m)，但提取的LTA幾乎無蛋白質(zhì)和核酸殘留，結(jié)構(gòu)完整，含有發(fā)揮黏附和免疫刺激作用的D-丙氨酸。因此，運用TrionⅩ-114法能提取結(jié)構(gòu)完整、純度較高的磷壁酸。
　　試驗二:分別使用不同濃度的LTA預處理HT-29細胞，然后再用不同濃度的金黃色葡萄球

3、菌（FITC標記）進行黏附試驗。結(jié)果顯示，試驗組相對于空白組金黃色葡萄球菌的黏附數(shù)量下降，且隨著LTA濃度的升高而下降。結(jié)果說明，金黃色葡萄球菌在黏附HT-29細胞過程中，其磷壁酸發(fā)揮著重要作用。
　　試驗三:不同濃度的LTA和金黃色葡萄球菌分別處理HT-29細胞一定時間，對炎癥因子的表達水平和胞外濃度進行測定。結(jié)果顯示，兩個試驗組都顯著促進了炎癥因子NF-κB、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α和抑制炎癥因子IL-10的

4、表達，另一抑制炎癥因子Hsp70的表達水平則無明顯變化。運用ELISA技術，對細胞培養(yǎng)基中的IL-6、IL-10、TNF-α、IL-12進行檢測，結(jié)果顯示LTA濃度為50μg mL-1、金黃色葡萄球菌濃度為1×107CFU mL-1時，IL-6、IL-10、TNF-α的濃度最高;LTA濃度為25μg mL-1、金黃色葡萄球菌濃度為1×109CFU mL-1時，細胞培養(yǎng)基中IL-12的水平最高。這一結(jié)果說明，磷壁酸在金黃色葡萄球菌與HT-