十字花科黑腐病菌XC1038基因的功能鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、十字花科黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv．campestris，簡稱Xcc）是一種能引起所有十字花科植物黑腐病的重要病原細菌，也是研究微生物與寄主相互作用機理的重要模式菌。為了系統(tǒng)地研究Xcc基因的功能，本實驗室構建了Tn5gusA5插入突變體庫，并篩選出了一批致病力降低的突變體。本研究選取了其中10個假設蛋白基因作為研究對象，通過定點突變和互補對這些基因的功能進行分析。首先運用自消除質粒pK18mob系統(tǒng)對

2、XC0612、XC0621、XC0622、XC0865、XC1038、XC1426、XC2021、XC2423、XC2565和XC3414進行突變，獲得了這些基因相應的突變體。
　　 致病性檢測結果表明，只有NK1038和PK1038致病力下降明顯，分別為野生型的1.1％和2％，其余11個突變體與野生型相比沒有明顯差異。表型檢測發(fā)現，與野生型相比，突變體PK1038的EPS產量、胞外酶的活性、生物膜的形成、泳動性及過敏反應等均無

3、明顯差異；其在寄主體內的繁殖能力減弱，在NYGB中生長速度降低，在MMX中停止生長。通過氨基酸補缺實驗，發(fā)現NK1038和PK1038均為L-甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型。采用PCR的方法擴增包含完整的XC1038的DNA片段并克隆到pLAFR3上，將獲得的重組質粒分別導入突變體NK1038和PK1038進行功能互補，發(fā)現其表型變化都能基本得到恢復。
　　 本研究結果表明XC1038是一個與L-甲硫氨酸合成相關的基因。推測可能是因為突變體

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