銀鯽線粒體基因組序列分析及ENU誘變銀鯽F1代遺傳差異分析.pdf

1、黑龍江省方止縣雙風(fēng)水庫的銀鯽（以下稱方正銀鯽）以個(gè)體大、生長快、適應(yīng)性強(qiáng)而聞名，并作為黑龍江銀鯽的優(yōu)良群體被移植到全國二十余省市，受到人們的普遍歡迎。因此，開展方正銀鯽的生物學(xué)研究，對(duì)發(fā)展鯽魚增養(yǎng)殖，培育新品種是很有必要的。方正銀鯽(Carassius autatus gibeblio Bloch)是以雌核發(fā)育為主、兩性融合為輔的兩性型種群，一年性成熟，因此利用常規(guī)選育技術(shù)，獲得新種的周期非常短，是一種非常好的育種材料。但其種內(nèi)的遺傳同

2、質(zhì)性非常高，要想獲得在生產(chǎn)性能上有顯著差別的養(yǎng)殖新品種常規(guī)選育的方法很難達(dá)到預(yù)期的效果，且工作量也比較大。因此，鑒于ENU的誘變特點(diǎn)，本研究利用方正銀鯽所具有的特殊生殖方式和繁殖周期短的特點(diǎn)，對(duì)繁育親本進(jìn)行了ENU浸泡誘變并繁殖F1代，這樣通過一代的選育不僅可以固定這些誘變位點(diǎn)，而且還可以快速獲得純種，對(duì)其它養(yǎng)殖魚類的育種工作也是有借鑒意義的。本論文研究的主要結(jié)果如下：
　　 1.銀鯽線粒體全基因組序列分析通過對(duì)方正銀鯽雌雄魚線

3、粒體DNA進(jìn)行全序列測(cè)序得到銀鯽雌雄魚線粒體基因組全長分別為：16582bp,16581bp，兩者的線粒體基因組長度相差1bp，基因的排列次序一致，類似于其它鯉科魚類。方正銀鯽線粒體DNA有37個(gè)基因（2個(gè)rRNA基因、22個(gè)tRNA基因和13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因）和1個(gè)非編碼區(qū)（D-Loop區(qū)）。L鏈上僅編碼9個(gè)基因（tRNA-Gln,tRNA-Ala,tRNA-Asn,RNA-Cys,tRNA-Tyr,tRNA-Ser,NADH6,tR

4、NA-Glu,tRNA-Pro），其余的基因均有H鏈編碼。在線粒體基因組中有10處基因重疊現(xiàn)象，共28bp；有15或16處基因間隔，總間隔序列長度70bp-73bp。13個(gè)蛋白編碼基因中有3個(gè)蛋白編碼基因（COXⅡ,ND4和Ctb）含有不完全終止密碼子(T),ND2、ATPase8、ND3和ND6終止密碼分別為TAG,其它的都為TAA。22個(gè)tRNA中除tRNA-Ser2缺少”DHU＝臂，為二葉草結(jié)構(gòu)外，其余21個(gè)tRNA基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)

5、全部屬于典型的三葉草結(jié)構(gòu)。
　　 2.ENU誘變銀鯽F1代線粒體基因組與正常銀鯽的比較研究通過對(duì)6尾（♂3，♀3）誘變組銀鯽和2尾（♂1，♀1）對(duì)照組銀鯽線粒體DNA進(jìn)行全序列測(cè)序比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)6尾誘變組銀鯽有4尾魚的mtDNA發(fā)生點(diǎn)突變率達(dá)到2％，這些突變位點(diǎn)覆蓋整個(gè)mtDNA，主要集中在13個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因、12SrRNA基因、16SrRNA基因和D-Loop控制區(qū)。同時(shí)在突變位點(diǎn)相對(duì)較多的NADHI和NADH2部分序列設(shè)計(jì)引

6、物，對(duì)誘變組55尾(♀23,♂32)和對(duì)照組17尾♀9,♂8)線粒體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序，測(cè)序結(jié)果比對(duì)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組雌魚雄魚均未發(fā)生變化，誘變組23尾雌魚僅有4尾發(fā)生堿基變化，32尾雄魚中有17尾發(fā)生堿基變化，誘變組的平均誘變率為38％，雄魚的誘變率大于雌魚的誘變率。
　　 3.ENU誘變銀鯽F1代AFLP指紋圖譜分析本論文采用9對(duì)AFLP引物組合對(duì)誘變銀鯽子代30尾（♀14,♂16），對(duì)照組子代25尾（♀14,♂11）進(jìn)行