水稻抗苯達松和磺酰脲類除草劑基因的分離與克隆.pdf

1、利用Y-射線誘變技術，中國科學家張集文研究員和日本學者MoriK先后分別從光/溫敏秈稻不育系w6154S和粳稻常規(guī)種農林8號的突變后代中獲得了苯達松敏感致死材料8077S和農林8號M。利用該致死突變位點標記光/溫敏秈稻不育系或一般質不育系，在苗期通過噴施一定濃度的苯達松溶液，可以去除不育系自交種子，保證雜交制種純度。過去的研究表明，兩個敏感突變體均受一對隱性基因基因控制，分別被命名為bel和bs!，利用SSR標記同時被定位在第三染色體上

2、，分別距離SSR標記RMl68為7.1cM和SSR標記RM3856為14.1cM。本研究在前期的研究基礎上，對敏感致死位點進行了精細定位，通過基岡互補和反義抑制，最終分離克隆了該基因。同時，利用RT—PCR技術，分析了該基因的表達特性。獲得的主要研究結果如下： 1.敏感性實驗表明，8077S和農林8號M對lOOmg/L的苯達松就具有一定敏感性，兩者的敏感性均比相應野生型的敏感性要低60倍左右；同時，農林8號M又比8077S要更敏

3、感； 2.等位性實驗表明，來自兩個不同突變體的突變位點互相等位； 3.利用SSR標記將致死位點精細定位在SSR標記3a和7a之間，其遺傳距離分別為0.1cM和0.4cM，進一步分析發(fā)現(xiàn)，致死位點與PCR—RFLP標記DP1和DP2共分離； 4.生物信息學分析表明，該致死位點可能與細胞色素P450基因有關，并確定了四個P450基因為候選基因。進一步對四個候選基因進行測序比較分析表明，其中一個P450基因，即CYPS