“黃海一號(hào)”中國(guó)對(duì)蝦抗白斑病的SRAP分子標(biāo)記.pdf

1、對(duì)蝦白斑綜合癥（White Spot Syndrome，WSS）是由對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(White Spot Syndrome Virus，WSSV)引起的一種對(duì)蝦傳染性疾病，該病的典型癥狀是病蝦甲殼內(nèi)側(cè)出現(xiàn)0.5～2.0 mm的白色斑點(diǎn)。該病不僅傳染性強(qiáng)、病程短，而且致死率高，目前尚無(wú)有效的措施。中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeus Chinensis)是我國(guó)主要的對(duì)蝦養(yǎng)殖品種，同樣受到WSSV的影響，感染該病毒后產(chǎn)量嚴(yán)重下降。

2、r>　　 本研究以河北省環(huán)渤海區(qū)分布的主要的對(duì)蝦品種——中國(guó)對(duì)蝦為研究對(duì)象，于2008年和2009年連續(xù)兩年采取抽樣和有針對(duì)性的進(jìn)行WSS的流行病學(xué)調(diào)查；然后監(jiān)測(cè)了中國(guó)對(duì)蝦在發(fā)病高危時(shí)期的主要水質(zhì)參數(shù)變化特點(diǎn)；最后應(yīng)用SRAP技術(shù)進(jìn)行了中國(guó)對(duì)蝦抗WSSV的分子標(biāo)記的篩選。對(duì)河北省環(huán)渤海區(qū)共8個(gè)中國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行的WSSV的流行病學(xué)調(diào)查，掌握了該地區(qū)WSS的發(fā)病情況和流行規(guī)律。選取滄州鑫海養(yǎng)殖場(chǎng)的兩個(gè)條件良好的池塘作為實(shí)驗(yàn)水質(zhì)監(jiān)測(cè)池塘，

3、2008年6月至8月對(duì)其中國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖水體進(jìn)行了溶解氧、氨氮值和亞硝酸鹽氮值的監(jiān)測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在7月末8月初時(shí)，當(dāng)水溫在25℃左右、pH值在7.85～8.12、溶解氧在7.1～8.4mg/L、亞硝酸鹽氮值在0.29～0.32mg/L、氨氮值在0.65～0.75之間時(shí)，WSSV疫情極有可能發(fā)生。用以上參數(shù)為WSSV中國(guó)對(duì)蝦水質(zhì)預(yù)警值，成功的預(yù)警了2009年秦皇島昌黎江鵬養(yǎng)殖場(chǎng)的對(duì)蝦白斑綜合癥的發(fā)生，降低了養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)損失。改良了中國(guó)對(duì)蝦病毒

4、DNA的提取方法，從中國(guó)對(duì)蝦肌肉組織中就可以提取適合質(zhì)量和濃度的病毒DNA供PCR監(jiān)測(cè)之用，而且取樣時(shí)間可以延長(zhǎng)到3天～5天。通過(guò)SRAP分子標(biāo)記技術(shù)，用篩選后的擴(kuò)增多態(tài)性良好的52對(duì)引物對(duì)中國(guó)對(duì)蝦WSSV感病組（人工投喂感染）和抗病組進(jìn)行SRAP-PCR，然后聚丙烯酰胺瓊脂糖凝膠電泳和銀染，共找到了11條特異性序列可能與中國(guó)對(duì)蝦WSSV抗性相關(guān)。進(jìn)一步應(yīng)用生物信息學(xué)方法，在NCBI公共數(shù)據(jù)庫(kù)上比對(duì)，找到編號(hào)為40.3、4.20、25.