兩種合成肽對(duì)單核細(xì)胞活性的影響.pdf

1、目的:胸腺肽是一類胸腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的對(duì)淋巴細(xì)胞分化、成熟和免疫活性具有重要作用的多肽激素的總稱，又稱胸腺激素或胸腺素。外周血單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。巨噬細(xì)胞不僅參與機(jī)體固有免疫應(yīng)答，同時(shí)也是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的啟動(dòng)者，是固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的橋梁。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體執(zhí)行細(xì)胞免疫功能的主要成員，可分為若干亞群，各有其特異的表面標(biāo)志和功能。根據(jù)其表達(dá)CD分子的不同可將其分為CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞等;根據(jù)其功能特征可將其分

2、為輔助T細(xì)胞(helper T cell，Th cell)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatoryT cell，Treg cell)、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)等亞群。巨噬細(xì)胞表面共刺激分子的變化、T淋巴細(xì)胞亞群的比例及分泌細(xì)胞因子的種類，可以反映機(jī)體免疫功能的狀態(tài)。因此，本研究以健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞和THP-1細(xì)胞作為研究對(duì)象，研究?jī)煞N合成肽對(duì)免疫細(xì)胞活性的作用。
　　方法:
　　

3、1、分別用不同濃度的兩種合成肽α1和α2及對(duì)照肽（胸腺肽）作用于正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞48h和72h，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+和CD8+T細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。
　　2、分別用不同濃度的兩種合成肽α1和α2及對(duì)照肽（胸腺肽）作用于正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞48h和72h后，用流式液相多重蛋白定量技術(shù)(CBA)檢測(cè)上清中IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和IL-1β的濃度。
　　3、分別用不同濃度的兩種合成肽α1和α2及對(duì)照肽(胸腺

4、肽)作用于人單核細(xì)胞株THP-1細(xì)胞24h和48h后，用流式液相多重蛋白定量技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β和TNF-α的表達(dá)水平;用流式技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面CD86和HLAII類分子的表達(dá)水平;CCK-8法檢測(cè)兩種合成肽對(duì)THP-1細(xì)胞增殖的影響;中性紅法檢測(cè)兩種合成肽對(duì)THP-1細(xì)胞吞噬功能的影響。
　　結(jié)果:
　　1、兩種合成肽對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞活性的影響
　　1.1 CBA檢測(cè)的結(jié)果顯示:
　　1.1.1與

5、陰性對(duì)照組相比，不同濃度的兩種合成肽作用于外周血單個(gè)核細(xì)胞48小時(shí)后，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的分泌明顯升高，尤以合成肽α1在濃度為10mg/ml時(shí)致其分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10顯著升高(P＜0.05);不同濃度的兩種合成肽與陽性對(duì)照組相比，除合成肽α1(10mg/ml)外均無顯著差異(P＞0.05)。
　　1.1.2與陽性和陰性對(duì)照組相比，兩種合成肽作用外周血單個(gè)核細(xì)胞72h后，TNF-

6、α、IL-1β、IL-6的分泌均無顯著差異(P＞0.05);而IL-2的分泌在兩種合成肽作用單個(gè)核細(xì)胞48h和72h后與對(duì)照組相比均無顯著差異(P＞0.05)。
　　1.2流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比，兩種合成肽對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞CD4+T、CD8+T細(xì)胞數(shù)量的影響無顯著差異（P＞0.05）。
　　2、兩種合成肽對(duì)單核細(xì)胞株THP-1活性的影響:
　　2.1與陰性對(duì)照組相比，濃度為5 mg/ml和10mg/ml的

7、合成肽α2作用THP-1細(xì)胞24h后，細(xì)胞表達(dá)HLAII類分子顯著增加(P＜0.05)。而其它濃度的合成肽不能引起HLAII類分子表達(dá)增加。與陰性和陽性組相比，兩種合成肽致THP-1表達(dá)CD86分子無顯著改變(P＞0.05)。
　　2.2與陰性和陽性組相比，兩種合成肽均不能明顯促進(jìn)THP-1細(xì)胞的增殖和吞噬。
　　2.3陰性組、陽性組、兩種合成肽各組中均未檢測(cè)到TNF-α和IL-1β。
　　結(jié)論:
　　1、兩種合